Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
физическим свойствам, а именно по удельной поверхности, среднему диаметру
и удельному объему пор. Эти три характеристики связаны следующим
уравнением (для цилиндрических пор):
Ф= (4Vp/vsp) • 103 (6)
32 Глава 2
Удельная
площадь
поверхности
\ .. **
Полярная неподвижная фаза, неполярный элюент, ,
"классическая хроматография
Ллкильные I г\ группы | V
Химически
модифиии
рованная
Обращенно фазовая неполярная неподвижная фаза, полярный элюент
Удельный объем пор
жжх
Функциональные группы полярные или неполярные, элюент полярный или
неполярный
Катионный+ Ионный обмен,
анионный ионная хрома
обмен тография
Нитрофенил Перенос заряда
Амино Сахара
Диол Полярные "бифер
Хиральный НЬ lflSl02"
Амидный ГПХ белков
Энантиомеры
гпх белков
Рис. 2.3. Пористые неподвижные фазы на основе силикагеля.
где ф - средний диаметр пор, нм; Vp - удельный объем пор, мл/г; vsp -
удельная поверхность, м2/г [26]. Увеличение удельной поверхности при
постоянном объеме пор приводит к уменьшению их диаметра.
В ВЭЖХ используются силикагели с удельной поверхностью примерно 300
м2/г, средним диаметром пор 10 нм и удельным объемом пор около 1 мл/г.
Силикагели со средним диаметром пор менее 5 нм пригодны для разделения
соединений с молекулярной массой менее 5000. В этом случае для разделения
доступно около 80% общего объема пор. Если такие силикагели используют в
гель-эксклюзионной хроматографии, верхний предел исключения составляет
200 000 (беспорядочные цепи) [27]. Эти характеристики силикагелей
сравнимы лишь в том случае, если силикагели получены по одной и той же
методике.
В хроматографии более важными характеристиками являются площадь
поверхности или объем пор, приходящиеся на •единицу объема колонки.
Силикагели, приготовленные специально для ВЭЖХ (например, силикагели со
сферическими частицами), имеют большую плотность, чем силикагели,
полученные полимеризацией кремниевой кислоты [28, 29]; упаковочная
плотность этих материалов составляет 0,6 и 0,35 г/мл соответственно.
Свойства некоторых коммерческих силикагелей, используемых в ВЭЖХ как
таковые или в виде носителей химически привитых фаз, приведены в табл.
2.3.
Удерживание малых молекул на двух материалах с одинаковой удельной
поверхностью (300 м2/г), например на лихро-¦сорбе Si 100 и зорбаксе Sil
при одинаковом составе элюента, может существенно отличаться. Если обе
колонки заполнены в
Хроматографическая колонка 33
Таблица 2.3. Свойства некоторых силикагелей
Силикагель Удельная Диаметр Удельный Пористость Плотность СО
Форма(r)
поверхность, пор, нм объем пор, упаковки, X
частиц
м2/г мл/г г/мл сх
Эуросорб 400 9 1,0 0,84 0,35 6,7
Н
Г иперсил 180 11 i,i 0,78 0,53 9,0
С
Лихросорб Si 100 320 10 1,0 0,83 0,34 7,0
[I
Лихросфер Si 100 250 10 1,2 0,84 0,35 5,5
с
Лихросфер Si 500 60 27 0,8 0,85 0,38 9,9
с
Нуклеосил 100 300 10 1 ,о 0,82 0,34 5,7
с
Партисил 400 9 0,9 0,84 0,35 7,5
н
Полнгосил 60 500 6 0,8 0,83 0,37 8,0
и
Порасил 350 10 1,1 0,86 0,37 7,2
н
Сервахром Si 100 300 10 1 ,2 0,84 0,34 6,7
н
Сферисорб SW 220 8 0,6 0,77 0,61 9,5
с
Зорбакс BP-Sil 300 6 0,5 0,71 0,60 3,9
с
а В 5'я-ной водной суспензии, - неправильная, с - сферическая.
идентичных условиях, колонка с зорбаксом имеет более высокий коэффициент
емкости вследствие большей плотности упаковки зорбакса.
Увеличение плотности упаковки колонки с 0,34 до 0,60 г/мл приводит к
уменьшению объема, занимаемого в колонке элюен-том. Общая пористость ет
уменьшается с 0,83 до 0,71. При стандартизации параметров сорбции этим
уменьшением объема элюента пренебрегать нельзя [30].
Обычно принято считать, что поверхность силикагеля обладает
кислотными свойствами [28, 29]. pH 5%-ной (по объему) суспензии "чистого"
силикагеля равен 4-5. У суспензий силикагелей с частицами неправильной
формы pH принимает почти нейтральное значение, тогда как у суспензий
силикагелей со сферическими частицами pH превышает 8 из-за наличия
примесей, попавших в процессе приготовления [30]. Очевидно, что различия
в значениях pH на поверхности силикагелей влияют на селективность
привитых фаз в полярных водных элюентах. Однако, как это ни странно, даже
