Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
По указанию авторов, каротин дает такую же окраску и предварительно должен быть удален.
Б. Определение содержания каротина
При определении каротина важно соблюсти следующие условия: 1) полностью извлечь каротиноиды из навески испытуемого вещества, 2) удалить жир, могущий помешать определению, с помощью омыления и 3) отделить каротин от сопутствующих желтых пигментов.
Первое условие достигается растиранием навески испытуемого материалах песком и вначале со спиртом для обезвоживания вещества (если для анализа взят свежий растительный материал; разумеется сухие объекты спиртом экстрагировать нет надобности), а затем с бензином (темп. кип. 80—100°), или петролейным эфиром, или: одновременно смесью бензина со спиртом.
Второе условие достигается методами омыления, уже описанными ранее. Третье условие достигается использованием так называемого метода хроматографической адсорбции, впервые разработанного русским ученым Цветом в 1906 г.
I. Определение каротина в свежем растительном материале
(по инструкции Государственной контрольной витаминной станции Министерства здравоохранения СССР)
Навеску испытуемого свежего материала в количестве 1—20 г (в зависимости от предполагаемого содержания каротина) растирают в ступке с стеклянным порошком и затем с 5-10-кратным количеством (по отношению к навеске) 96%-ного этилового спирта. После растирания материала со спиртом в ступку добавляют небольшими порциями 20—30 мл бензина (с точкой кипения от 80 до 100°) или петролейного эфира (темп. кип. 40—60°) при растирании смеси. Полученный экстракт фильтруют, не перенося осадка на фильтр. Экстрагирование бензином или петролейным эфиром повторяют таким же образом до тех пор, пока последующие порции экстракта не станут бесцветными.
Бензиновый или петролейно-эфирный экстракт переносят в делительную воронку, туда же прибавляют по каплям воды до полного разделения слоев. Нижний (спирто-водный) слой сливают в другую делительную воронку и промывают его два раза бензином или петролейным эфиром, порциями по 10 мл.
Объединенные бензиновые или петролейные вытяжки переносят в колбу и концентрируют до объема 20—30 мл (при пользовании
'бензином отгонку ведут на песчаной или масляной бане, при пользовании петролейным эфиром—на водяной).
К полученному раствору добавляют равный объем5%-ного спиртового раствора щелочи и подвергают омылению в колбе с обратным холодильником на водяной бане при 40° в течение трех часов.
Омыленный раствор переносят в делительную воронку, туда же добавдяют несколько миллилитров воды по полного разделения слоев. После отделения водно-спиртового слоя бензиновую или петролейную вытяжку восемь-десять раз промывают водой. Отмытый от спирта бензиновый экстракт сушат безводным сернокислым натрием (до полного исчезновения мутности раствора), •отфильтровывают и концентрируют в колбочке до объема 5—10 мл.
Сгущенный экстракт пропускают через адсорбционную колонку, наполненную окисью магния или окисью алюминия.
Колонка для адсорбции изготовляется следующим •образом. Стеклянную толстостенную трубку (можно воспользоваться негодной бюреткой и обрезать у нее верхнюю часть) диаметром 1—2 см, длин й 15—20 см, суженную на конце, вставляют узким концом через пробку в колбу Бунзена. В узкую часть трубки вкладывают кусочек гигроскопической ваты, затем до половины трубки насыпают адсорбент, сильно уплотняя его толстой стеклянной палочкой, сверху помещают тонкий слой безводного сернокислого натрия. (Можно также приготовить «кашицу» из адсорбента с бензином и этой «кашицей» заполнять трубку). Колбу соединяют с водоструйным насосом, в трубку наливают бензин или петролей-ный эфир, который должен равномерно смочить весь столбик адсорбента, после чего через колонку начинают пропускать испытуемый раствор каротина. В верхней части колонки задерживаются хлорофилл, ликопин, а в нижней части колонки—p-каротин. Его вымывают из колонки пропусканием чистого растворителя до тех пор, пока капли, вытекающие из колонки, не станут бесцветными.
Нужно следить, чтобы поверх колонки всегда оставался небольшой слой жидкости и чтобы пузырьки воздуха не проскакивали через адсорбирующую массу. Скорость истечения раствора через колонку нужно отрегулировать так, чтобы в одну минуту вытекало около 60 капель раствора.
После пропускания через колонку экстракта и промывки колонки чистым растворителем экстракт и промывную жидкость объединяют в мерной колбе, доводят до объема растворителем, основательно перемешивают содержимое колбы и колориметрируют желтую окраску раствора в колориметре Дюбоска с стандартным раствором бихромата ка/щя или азобензола, устанавливая стандартный раствор на 10 мм.
Вычисление результатов определения производят, пользуясь следующей формулой:
где: х—содержание каротина в испытуемом продукте, в мг%;
к—коэфициент: при пользовании в качестве стандарта азобензолом—0,00235; бихроматом калия—0.00208;
/г—высота столба стандартного раствора (10 мм);
—высота столба испытуемого раствора (допускается колебании е от 8 до 12 мм);
