Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
Способы выделения биотина из естественных продуктов разработаны детально, однако они имеют более научный, чем практи-
ческий интерес. Промышленное получение препаратов биотина сводится к получению гидролизированных или автолизированных печеночных и дрожжевых экстрактов с последующей их очисткой от белков и упариванием до состояния концентрата.
1 г метилового эфира биотина соответствует 27 ООО ООО крысиных, или 25 ООО ООО ООО «дрожжевых» единиц.
Харрис, Буль и Мосинго (6) осуществили синтез биотина следующим образом.
Цистин восстанавливался в аммиаке и конденсировался с хло-руксусной кислотой. Полученный [3-аланин (I) бензоилировался и этерифицировался в N-бензоил - (карбоксиметил - меркапто)-аланин (II). Это вещество превращалось в диметиловый эфир и обрабатывалось метоксилом натрия. Получалась натриевая соль метилового эфира 4-бензамидо-3-кетотетрагидро-2-тиофен-карбоновой кислоты (III). В процессе реакции происходит рацемизация. Натриевая соль гидролизуется и декарбоксилируется в водном растворе уксусной и соляной кислотами, образуя 4-бензамидо-З-кетотетрагидро-тиофен (IV).
Валериановая кислота боковой цепи вводится при помощи альдегида, полученного из глутаровой кислоты. Кислота переводится в глутаровый ангидрид, в монометиловый эфир, в карбоксимето-ксибутирил-хлорид (V) и, последовательно, в метил-у-формилбу-тират (восстановлением, по Розенмунду).
Естеральдегид (VI) конденсируется с кетоном (IV), образуя метиловый эфир 4-бензамидо-3-кето-Д-тетрагидро-2-тиофенвалериано-вой кислоты (VII). Ненасыщенное соединение (VII), реагируя с гидроксиламином в пиридине, образует соединение (VIII), которое восстанавливается в уксусной кислоте цинковой пылью (IX). Это соединение гидрогенизировалось и при дробной кристаллизации получались два рацемата (X), которые после гидролиза образовывали диаминокислоты (XI). Обработка этих соединений фосгеном давала два рацемата гексагидро-2-оксо-1-тио-имидазол-4-валериановой кислоты (XII), названных: (//-биотином с темп,
плав. 232° и dZ-аллобиотином с темп. плав. 194—196°; dl-биотин получался из диамидоэфира (X), плавящегося при 153—154°. Эфиры (//-биотина с /-миндальной кислотой при расщеплении давали биотин
NH2
NHCO • С6Н5
НООС • СН2 • S • СН2 • СН • СООН НООС •СН2 • S• СН2 • СН • СООСНз
(I)
(II)
NH • СО • С„Н5 NH • СО * С6Н5 I I
CH-C-ONa СН-СО
I II II
СН2 с • соосн» сн2 сн2
\ / \ /
S
С ICO (СН2)3 (V)
(IV) -f (VI) -
СООСНз ОСН (СН2)з
соосн.
(VI)
¦ NH • СО • С6Н5 I
СН — СО
I I
СН2 C = CH(CH2)3-COOCHs
S
(VII)
NH • СО • СвН5 I
СН—С = NOH
СН, С = СН(СН2)3
\/
S
(VIII)
NH • СО ¦ С6Н5
СООСНз
NH • СО ¦ С6Н5
I
-> СН-С • NH • СО • СН2
I II
СИ., с (СН.,)4 • СООСН2
\/
S
(IX)
NH, • NH2H2S04
СН—СН • NH • со • сн3 сн —сн
СН2 СН(СН.,)4 • СООСНз \ /
(X)
СН2 СН (СН„)4 • СООН \ /
S
(XI)
со
/ ч
NH NH
I I сн-сн
I I
СН2 СН(СН2)4 • СООН \ /
S
(XII)
В последнее время синтезировано много аналогов биотина; однако в микробиологических опытах было показано, что активность
й(/-оксибиотина значительно снижена: для Lactobacillus arabino-
sus она составляет 505/0, для L. casei—40%; для Saccharomyces cerevisiae 25% и для Rhizobium—только 15% ростовой активности биотина.
о о
II II
с
HN’/^NH
hn/Nmh
НС!
СН
НС
биотин
(СН2)„ - СООН
СН
СН
Н'2С\/
-o/N)-
сульфобиотин
(СН,)Я
СООН
---
п=3---нор---биотин...... 230---233®
п---5---гомобиотин....... 220-221®
л---6---bis-гомоС иотин .... 201---203°
71=5=7---tris-гомобиотин .... 216°
сульфо-гомобиотин...... 260-261°
сульфо-Ыэ-гомобиотин . . . , 243---245е
сульфо-Шэ-гомобиотин . . . 244---246°
В настоящее время выпускается препарат б и о т. и н в ампулах, в виде коричневого прозрачного концентрата с содержанием до 5000 крысиных единиц в ампуле. Кроме того, имеет распространение кристаллический препарат биотина, являющийся его метиловым эфиром. Выпускается в виде растворов в ампулах для парэнтерального применения.
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Определение витамина Н производится биологическим путем на белых крысах, на цыплятах или при помощи ростового метода на микроорганизмах. В качестве микробиологического метода наибольшее распространение получил метод Портера и Пелькцар в модификации Петерсона (3). Он основан на том, что бактерии Clostridium butylicum развиваются в аэробных условиях только в присутствии биотина, причем развитие их пропорционально наличию в питательной смеси биотина. Микроорганизмы выращивают на среде следующего состава: 2% глюкозы+0,1% аспара-
