Лабораторный практикум по общей технологии пищевых производств -
ISBN 5-10—002282—5
Скачать (прямая ссылка):
При анализе препаратов из грибных культур в конические колбы вместимостью 50 см3 вносят пипеткой 20 см3 субстрата (1%-ный раствор крахмала) и выдерживают в термостате или водяной бане с температурой 30±0,02°С в течение 10 мин, затем в колбы добавляют от 1 до 10 см3 раствора ферментного препарата и перемешивают. Общий объем реакционной смеси должен быть 30 см3. Недостающий объем дополняют дистиллированной водой, которую вводят перед добавлением раствора ферментного препарата. Реакционную смесь выдерживают в термостате 10 мин, а затем для прекращения действия фермента добавляют 2 см3 1 н. раствора соляной кислоты.
Для определения образовавшейся мальтозы содержимое колбы количественно переносят в коническую колбу вместимостью 300 см3, смывая остатки реакционной смеси дистиллированной водой в эту же колбу, добавляют туда пипеткой 20 см3 0,1 н. раствора йода и 60 см3 0,1 н. раствора NaOH или КОН. Раствор гидроксида натрия или калия добавляют по каплям при перемешивании, накрывают колбу часовым стеклом и оставляют на 15 мин в защищенном от света месте. Потом вводят 2 см3 H2SO4 (1:4) и титруют выделившийся йод 0,1 н. раствором тиосульфата натрия.
Одновременно ставят контрольный опыт в конической колбе с теми же количествами всех реагентов, только раствор ферментного препарата вводят после добавления 2 см3 1 н. раствора соляной кислоты (без выдерживания в термостате).
Разница между результатом титрования контрольного и опытного растворов должна составлять 0,5—6,0 см3 0,1 н. раствора тиосульфата натрия. Если разница меньше 0,5 или больше 6,0 см3, то анализ повторяют с большим ил,и меньшим количеством раствора ферментного препарата.
При определении осахаривающей активности препаратов из
231
бактерий после введения 20 см3 0,1 н. раствора йода к смеси добавляют 52,5 см3 0,1 н. раствора NaOH или КОН, остальной ход определения остается без изменений.
Осахаривающую активность ОС (в ед/г) в препаратах Asp. oryzae определяют по формуле
Od =
mt
где е —количество единиц активности, найденное по табл. 33 в соответствии С результатами титрования (разность титрований контрольного и опытного растворов 0,1 н. раствором ЫагБгОз), мкэкв гликозидиых связей; т — масса Навески препарата, взятого .на анализ, г; t — время гидролиза, мин.
Таблица 33
Количество 0,1 я. раствора Na1SiO,, cm«(Vk-V0)
Единицы ОС (е)
Количество 0,1 и. раствора Na1S1O,,
«• (VK~Vo)
Единицы ОС (е)
Количество 0,1 и. раствора Na,S,0„
см"
(VK~Vo)
Единицы ОС («)
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1,5 1.6 1,7 1,8 1,9 2,0
5,0 10,0 15,0 20,2 25,5 30,8 36,2 41,6 47,0 52,6 58,2 63,9 69,7 75,5 81,5 87,6 93,6 99,8 106,1 112,5
2,1 2,2 2,3 2,4 2,5 2,6 2,7 2,8 2,9 3,0 3,1 3,2 3,3 3,4 3,5 3,6 3,7 3,8 3,9 4,0
118,9 125,5 132,1 138,9 145,8 152,8 159,9 167,1 174,4 181,9 189,5 197,2 205,1 213,1 221,3 229,6 238,1 246,8 255,6 264,6
4,1 4,2 4,3 4,4 4,5 4,6 4,7 4,8 4,9 5,0 5,1 5,2 5,3 5,4 5,5 5,6 5,7 5,8 5,9 6,0
273,8 283,2 .292,8 302,7 312,8 323,1 333,6 344,4 355,5 366,9 378,6 390,6 402,9 415,6 428.8 442,3 456,2 470,6 485,0 501,2
Осахаривающую активность в препаратах Asp. awamori определяют по формуле
ос = (У„-Уо)50 _ 2 mt
где (Vk—V0) —разность титрований контрольного и опытного растворов 0,1 н. раствором Na2S2O3, см3; 50 — коэффициент пересчета на мкэкв гликозидных связей.
Осахаривающую активность в препаратах Bacillus subtilis (Амилосубтилин Г 1Ox) определяют по формуле
ч
ОСь=
mt
т
где ei — количество единиц активности, найденное по табл. 34 в соответствии с результатом титрования (разность титрований контрольного и опытного растворов 0,1 и. раствором тиосульфата натрия), мкэкв гликозидных связей.
Таблица 34
Количество
Количество
Количество
0,1 и. раствора NajSjOj,, смЗ
Единицы
0,1 н. раствора
Единицы
0,1 и. раствора
ОС (а)
Na2S8O,, см»
ОС (€,)
Na8SjO3, см" (vk-V0)
0,9
45,0
2,0
113,1
3,1
250,6
1.0
52,1
2,1
119,9
3,2
278,2
1.1
58,7
2,2
128,8
3,3
312,1
1.2
63,3
2,3
138,0
3,4
366,2
1.3
67,8
2,4
150,3
3,5
452,3
1.4
74,7
2,5
158,3
3,6
517,9
1,5
81,4
2,6
169,7
3,7
585,7
1.6
85,9
2,7
180,9,
3,8
662,7
1.7
92,7
2,8
192,3
3,9
740,3
1.8
99,6
2,9
209,9
4.0
811,9
1.9
108,5
3,0
226,1
4,1
891,6
4.2
968,1
CM3
вд/г
CM3
ед/г
Запись в лабораторном журнале
Количество 0,1 и. раствора тиосульфата натрия, пошедшее на титрование контрольного опыта (VK) Количество 0,1 н. раствора тиосульфата натрия, пошедшее на титрование опытного раствора (V0) Количество единиц активности (по табл. 33, 34) (е) Количество ферментного раствора, взятого иа анализ (а)
Количество ферментного препарата, участвовавшего в реакции гидролиза [(m=0,la/100)] ©сахарнвающая активность исследуемого препарата OC1, OC2 или OC3 Заключение
Определение глюкоамилазной активности. Метод основан иа определении глюкозы, образующейся при гидролизе1 растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой. Глюкоамилазная активность (ГлА) характеризует способность ферментных материалов катализировать расщепление растворимого ,крахмала до глюкозы и выражается числом единиц активности в 1 г исследуемого препарата.
