Успехи огранической химии, Том 1 - Рафаэль Р.
Скачать (прямая ссылка):
RCONHCHR'CONHCHR"COOCH3 Восстачовленн%
—> RCONHCHR'CONHCHR"CH2OH или ^Гги^ XXIV
->. RCONHCHR'COOCH2CHR" • NH31 Восстановление >
XXV
—> RCONHCHR'CH2OH + NH2CHR"CH2OH XXVI" XXVH
248
Селективное расщепление белков
Подобный метод мог бы оказаться особенно пригодным для расщепления пептидов, не содержащих остатков серина или треонина (помимо N-концевых остатков), например пептидов, которые образуются при расщеплении белков методом, связанным с миграцией ацильной группы (см. стр. 216—224).
При проведении исследования этим методом на стадии восстановления и перегруппировки встречаются трудности. Так, при восстановлении крупных пептидов, не растворимых в реакционной среде, для получения удовлетворительных результатов требуется повышенная температура. Кроме того, восстановительное расщепление пептидных связей, особенно связей, образованных карбоксильными группами глицина и алаяина, может протекать другим путем:
—СО—NH-—>• —CH2OH + NH2-
Подобное течение реакции считается [58] причиной наблюдавшихся ранее отклонений при определении С-концевых аминокислот в этерифицированном инсулине.
Трудности, которые встречаются при ацильной перегруппировке от N к О, рассматривались выше (стр. 216—224). Однако в случае небольших пептидов, растворимых в органических растворителях, в разработанных Бейли [15] условиях реакции, по-видимому, можно успешно осуществить эту перегруппировку.
Разработаны методы выделения и определения ?-амино-спиртов в микроколичествах, основанные на-хроматографиче-ском разделении и спектрофотометрическом исследовании ДНФ-производных аминоспиртов [65, 127, 165, 168] или самих аминоспиртов, которые удается количественно определить путем окисления периодатом до формальдегида [250].
ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ
Некоторые из описанных в данном обзоре методов селективного расщепления играют важную роль в определении последовательности расположения аминокислот в пептидах и белках. В настоящее время только наиболее перспективные из этих методов находят практическое применение в той мере, в какой они пригодны для установления связи между строением и биологической активностью белковых соединений. Однако для исследования более сложных белков могут потребоваться другие методы. Можно надеяться, что проблемы, которые возникнут в связи с изучением этих белков, будут стимулировать изыскание новых методов селективного рас-
Литература
249
щеплення. Для этих исследований знание последовательности аминокислот во все возрастающем количестве пептидов является особенно важным.
ЛИТЕРАТУРА
1. Abderhalden E., Brockmann H., Biochem. Z., 225, 386 (1930).
2. Acher R., Laurila U. R., Thaureaux J., Fromageot C1 Biochim. et Biophys. Acta, 14, 151 (1954).
3. A k a b о r і S., O h n о K., I k e n а k а Т., O k a d a Y., H a n a f u s a H., Haruna I., Tsugita A., Sugae K-, Matsushima T., Bull. Chem. Soc. Japan, 29, 507 (1956).
4. Akabori S., Oh no K-, Narita K., Bull. Chem. Soc. Japan, 25, 214 (1952).
5. Alexander P., Hudson R. F., Fox M., Biochem. J., 46, 27 (1950).
6. Anderson W., Compt. rend. trav. lab. Carlsberg, Ser. chim., 29, 385 (1955).
7. And о T., Nagai Y., Fujioka H., J. Biochem. (Tokyo), 44, 779 (1957).
8. Anf in sen С. В., J. Biol. Chem., 221, 405 (1956).
9. A n f і n s e n С. В., Federation Proc, 16, 783 (1957).
10. Anfinsen С. В., Redfield R. R., Advances in Protein Chem., 11, 1 (1956).
11. Anf і risen С. B., Redfield R. R., Ch о ate W. L., Page J., Carrol W. R., J. Biol. Chem., 207, 201 (1954).
12. Anfinsen С. B., SeIa M., Tritch H., Arch. Biochem. Biophys., 65, 156 (1956).
13. Bailey J. L., см. Chibnall A. C in Stoop R., Ed., Les Proteines Rapports et Discussions, Institut Intern, de Chimie Solvay: Brussels, 1953, p. 119.
14. Bailey J. L., Biochem. J., 60, 170 (1955). . ; ' '
15. Bailey J. L., Biochem. J„ 60, 173 (1955). •
16. Bailey J. L., Biochem. J., 67, 21P (1957).
17. Bailey J. L., Moore S., Stein W. H., J. Biol. Chem., 221, 143 (1956).
18. Bailey K., Bettelheim F. R., Biochem. et Biophys. Acta, 18, 495 (1955).
19. Baptist V. H., Bull H. B., J. Am. Chem. Soc., 75, 1727 (1953).
20. Б а г 11 e 11 M. F., J o h 1 A., R о e s k e R., S t e d m a n R. J., Stewart F. H. С, Ward D. N., du Vigneaud V., J. Am. Chem. Soc, 78, 2906 (1956).
21. Battersby A. R., Robinson J. C, J. Chem. Soc, 1955, 259.
22. Battersby A. R., Robinson J. C, J. Chem. Soc, 1956, 2076.
23. Bell P. H-, Howard K. S.. Shepherd R. G., Finn В. M., M e і s e n h e I d e r J, H., J. Am, Chem. Soc, 78, 5059 (1956),
Селективное расщепление белков
24. Bend a U J. R.. Biochem. J., 61, ЗІ (1955).
25. Benfey В. J., Purvis J. L., J. Am. Chem. Soc., 77, 5167 (1955)'.
26. Berger A., B en-I sh а і D., J. Org. Chem., 17, 1564 (1952).
'27. Bergmann M., Fruton J. S., in Nord F. F., Ed., Advances in Enzymology, Vol. I, Interscience Publishers, New York, 1941, p. 63
28. Bergmann M., Miekeley A., Z. physiol. Chem., 140, 128 (1924).
