Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
Примечания к блок-схеме на рис. 27: ^
раствор А - содержит Р-легкогидролизируемый = Р-минеральный + Р-сахарофосфатов; раствор В содержит Р-липидов; раствор С содержит Р-нуклеиновых кислот; осадок III содержит Р-протеидов.
Растворы получают последовательным воздействием экстрагентов: раствор А - 40 см"; 3%-го раствора HClO4; раствор В - 20 CMj смеси спирта и эфира, 10 CMJ ВОДЫ; раствор С - 20 CMj 1 н. HClO4; 20 CMJ раствора 0,5 н. HClO4
402
о со
НАВЕСКА
раствор А
определение Р-минерального
озоление раствора, определение Р-мин + Р-сахарофосфатов
Рис. 27. Схема последовательного извлечения фосфора из органического вещества растений
осадок I
Р-липидов, Р-нуклеиновых кислот, Р-протеидов
извлечение Р-липидов
раствор В
озоление р-ра определение Р-липидов
осадок II
Рнуклеиновых кислот, Р-протеидов
раствор С
озоление раствора, определение Р-нуклеиновых кислот
извлечение Рнуклиновых кислот
осадок III
Р-протеидов
J
озоление осадка, определение Р-протеидов
Извлечение легкогидролизуемого (кислоторастворимого) фосфора
Навеску 2 - 4 ± 0,002 г измельченного свежего растительного материала или фиксированного жидким азотом, или свежезамороженного берут на аналитических весах с одновременным определением содержания абсолютно сухого вещества в стеклянных бюксах. При анализе сухого материала навеска 0,3 - 0,5 ± 0,001 г.
Приготовление раствора А. Навеску помещают в коническую колбу объемом 100 см". ДЛЯ определения фосфора следует использовать колбы градуированные с притертой стеклянной пробкой или обернуть резиновые пробки плотно фольгой. Приливают в колбу 40 см3 3% раствора хлорной кислоты, перемешивают, взбалтывают на ротаторе 1 час.
Надосадочную жидкость методом декантации переносят в мерную колбу на 200 см3 через бумажный беззольный фильтр. Извлечение повторяют, в том же режиме приливая снова 40 см3 3% хлорной кислоты в течение 40 мин. Надосадочную жидкость вместе с навеской переносят количественно на бумажный фильтр.
Осадок на фильтре промывают малыми порциями 3% раствора HClO4 3-4 раза. Этот осадок затем используют для определения фосфора липидов и пр. (см. блок-схему на с. 401).
Экстрагент и промывной раствор собирают в колбу. Раствор в колбе перемешивают, доводят до метки дистиллированной водой, снова перемешивают. Раствор А пригоден для определения P минерального и суммы Р-минерального и Р-органического кислоторастворимого, который в основном представлен фосфором сахарофосфатов.
Определение кислоторастворимого фосфора
Так как часть кислоторастворимого фосфора связана в виде сахарофосфатов необходимо провести озоление органического вещества. В колбу Кьельдаля помещают 25 или 50 см" раствора А, упаривают объем до 5 - 7 см" на электроплитке, охлаждают, приливают 5 см3 концентрированной серной кислоты, продолжают озоление до обесцвечивания раствора.
Если процедура сжигания затягивается на 3 - 4 ч, добавляют по стенкам охлажденной колбы Кьельдаля 1 см" концентрированной хлорной кислоты, продолжают озоление.
Бесцветный, прозрачный раствор охлаждают и количественно переносят в мерную колбу на 100 см". Для этого в колбу Кьельдаля наливают 10 см" воды, перемешивают, охлаждают, добавляют 50 см" горячей дистиллированной воды, активно перемешивают, переносят в мерную колбу на 100 см\ Колбу Кьельдаля многократно споласкивают малыми порциями горячей дистиллированной воды, так как растворы концентрированных кислот плохо отмываются холодной водой. Промывные воды сливают так же в мерную колбу. Раствор в мерной
404
колбе перемешивают, охлаждают, доводят до метки, снова перемешивают. Раствор используют для определения Р-кислоторастворимого.
Р-кислоторастворимый - P-мин. + P-сахарофосфатов
Следовательно, Рсахарофосфатов находят по разности:
% P-сахарофосфатов = % P-кислоторастворимого - % Р-минерального.
Определение фосфора минерального
Ход анализа
В мерную колбу на 50 см"5 помещают от 5 до 20 см" раствора А в зависимости от качества растительного материала, доводят объем до « 40 см3 дистиллированной водой, перемешивают, нейтрализуют по каплям 10%-м раствором аммиака по фенолфталеину, каждую каплю перемешивают. Слабо-розовую окраску раствора от избытка аммиака снимают, добавляя в колбу по каплям 1%-й раствор H2SO4. Бесцветный раствор имеет pH 8,2. Только при этом значении в растворе образуется комплексная соль молибдата аммония, которая не выпадает в осадок.
Для окрашивания раствора в мерную колбу добавляют 1 см" сульфатмолибденовой жидкости, перемешивают и приливают 3 капли восстановителя - раствора хлористого олова, снова тщательно перемешивают, доводят раствор до метки.
Раствор окрашивается в сине-голубой цвет. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации фосфора в растворе.
В течение 15 мин измеряют оптическую плотность раствора на фотокалориметре при красном светофильтре (X « 650 нм), кюветы d = 20 мм. Таким образом измеряют содержание фосфора и во всех последующих фракциях.
Определение фосфора липидов
Ход анализа
Снимают фильтр с осадком и переносят его на стеклянную воронку с коротким и широким носиком. Воронку вставляют в ту же коническую колбу, разворачивают фильтр и раскладывают его по краю воронки, прижимая фильтр к стеклу. Из промывалки осадок полностью смывают в коническую колбочку смесью растворов (спирт : эфир = 3:1), используя 20 см" экстрагента, перемешивают от руки или стеклянной палочкой, закрывают пробками и оставляют на ночь при комнатной температуре, т.е. около 20°С. После этого надосадочную жидкость методом декантации сливают через стеклянную воронку в колбу Кьельдаля объемом 100 -150 см" с широким горлом.
