Практикум по гистологии, цитологии и эмбриологии - Юриной Н.А.
ISBN 5-209-00126-1
Скачать (прямая ссылка):
Окуляр — оптическая система, которая служит в качестве лупы при визуальном наблюдении увеличенного изображения предмета, даваемого объективом, и в качестве проекционного устройства при микрофотографировании. Окуляр обычно увеличивает изображение в 5—25 раз.
Наиболее распространенными являются окуляры Гюйгенса и компенсационные. 'Окуляры типа Гюйгенса применяются в сочетании с ахроматами, юкуляры компенсационного тина — с апохроматами и планахроматами.
Важнейшими характеристиками микроскопа являются разрешающая .способность и увеличение.
Разрешающая способность (d) — минимальное расстояние между двумя точками объекта, которые видны раздельно.
Известно, что
<2=0,61 •------.-----,
rt-sm а
где % — длина волны света, в котором наблюдается объект; п — показатель преломления среды между объектом и объективом; а — угол между оптической осыо объектива и наиболее отклоненным лучом, попадающим в объектив.
Величина п-sin os является важной оптической характеристикой объектива и называется числовой апертурой объектива. Из формулы следует, что разрешающая способность микроскопа тем выше, чем меньше длина волны и чем больше апертура объектива.
Увеличение микроскопа — величина, показывающая, во сколько раз линейные размеры изображения, формируемого оптической системой микроскопа, больше линейных размеров объекта. Увеличение микроскопа зависит от увеличений объектива и окуляра и численно равно произведению этих увеличений. При этом необходимо помнить, что объектив увеличивает изучаемый объект, а окуляр — изображение, полученное при помощи объектива, не добавляя к нему новых деталей, не выявленных объективом.
Современные оптические микроскопы имеют предел полезного увеличения до 1500 раз, Большее увеличение практически бесполезно, так как оно не ведет к выявлению, новых деталей микрообъекта.
Микроскопироваиие гистологического препарата начинают с установки' освещения. Для этого' с помощью' вогнутого зеркала (при естественном освещении) или плоского (при искусственном освещении) достигается равномерное освещение поля зрения. Препарат помещается 'на предметный столик покровным стеклом вверх. Изучение препарата начинают при малом увеличении. 'Расстояние между , объективом и покровным стеклом препарата должно быть около 1 см. Наводка на резкость производится с помощью макровинта. Перемещая препарат на предметном столике, рассматривают его детали по всей площади.
К изучению препарата на большом увеличении приступают йосле осмотра его при малом увеличении. Установив в центр поля зрения участок препарата, который следует изучить при большом увеличении, с помощью револьверного устройства ставят более мощный объектив. Наводка на резкость производится с помощью микровинта плавным вращением его вперед или назад.
Для изучения очень мелких гистологических структур используется иммерсия, позволяющая повысить разрешающую способность микроскопа. При этом на покровное стекло препарата наносится капля иммерсионной жидкости (вода, глицерин, кедровое масло и др.)» после чего с помощью макровинта объектив острожно опускается до соприкосновения его фронтальной линзы с иммерсионной жидкостью. Плавно вращая микровинт, добиваются появления четкого изображения. По окончании работы иммерсионная жидкость удаляется с объектива и покровного стекла сухой марлей.
При работе на больших увеличениях конденсор необходимо поднять вплоть до соприкосновения с предметным стеклом. При работе на малом увеличении конденсор следует несколько опустить.
Специальные методы светооптической микроскопии
Сравнительная микроскопия. Оптическая схема микроскопа сравнения представляет собой систему из двух микроскопов с собственными осветительными устройствами, Изображения левого и правого объектов с помощью объективов и прямоугольных призм сводятся на разделительную призму в одно общее поле зрения окуляра. Поскольку призменный блок неподвижен, то поле зрения всегда остается разделенным на две равные части и, таким образом, в поле зрения микроскопа оба исследуемых объекта всегда видны одновременно. При необходимости изображение может быть спроектировано на матовую пластинку.
Микроскопы сравнения наиболее эффективны при проведении сравнительного микроскопического анализа нормальных и патологически измененных тканей, клеток, при изучении изменений в исследуемом объекте во времени.
Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения малоконт-^астных прозрачных препаратов, которые почти не поглощают света, т. е. не изменяют амплитуду световой волны, но изменяют фазу проходящей волны. Однако глаз не может регистрировать фазовых изменений.
Метод фазового контраста дает возможность преобразовать фазовые изменения света в амплитудные, в результате чего появляется видимое изображение препарата, в котором распределение освещенностей соответствует распределению фаз. Практически метод фазового контраста реализуется введением в оптическую систему микроскопа кольцевой диафрагмы и специальной фазовой пластинки. Метод используется для изучения живых объектов или неокрашенных препаратов.
