Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
анилином и также
о м.* "м" ммм ..м. наносят на гель (дорожка 4).
0 Рис. 9-25. Радиоавтографическое
определение пуринов,
а ммм мм* ммм ммм важных для расщепления и
полиаденилирования (задача
о 9-30). Последовательность РНК-
предшественника указана
о слева, причем 5'-конец расположен внизу, а
З'-конец-ввер-
° ху. Все молекулы РНК были модифицированы в
реакции
q ммм ммм ммм ммм с диэтилпирокарбонатом. Дорожка 1 - РНК,
не обработан-
ч ная экстрактом (Необработанная). Дорожка
2-РНК,
0 обработанная экстрактом, но не
полиаденилированная
* м"м мм. [ро1у(А)"]. Дорожка 3-полиаденилированная
РНК
с [ро1у(А)+]. Дорожка 4-расщепленная, но не
полиаденили-
1 2 3 4 рованная РНК (Расщепленная).
Рис. 9-2*
нуклеот!
предшес
нуклеоп
(задача '
ности И!
способш
предшес
туру, по
Участок
кальной
участок
и (Б). В.
терный ,
обознач<
Клеточное ядро 153
A. Какие концы исходных молекул РНК были помечены?
Б. Объясните, почему полосы, соответствующие сигналу AAUAAA (отмечены
на рис. 9-25 квадратной скобкой), отсутствуют в случае poly(A)+-PHK и
расщепленной РНК?
B. Объясните, почему полоса, помеченная стрелкой [нуклеотид, к
которому в норме добавляется ро1у(А)+], отсутствует в случае poly(A)+-PHK
и присутствует в случае расщепленной РНК.
Г. Какие нуклеотиды А и G важны для расщепления и какие для
полиаденилирования?
Д. Какую информацию можно получить, пометив молекулы РНК с другого
конца?
9-31 В отличие от большинства информационных РНК гистоновые мРНК не
содержат ро1у(А) на своих З'-концах. Вместо этого они содержат другие
дополнительные нуклеотиды за счет того, что отщепляются от своего
длинного предшественника на несколько нуклеотидов ближе к З'-концу
шпилечной структуры. Кроме того, правильный процессинг предшественника
гистоновой мРНК зависит от консервативной последовательности,
расположенной непосредственно за участком расщепления. Судя по данным,
полученным на морских ежах, эта консервативная последовательность
взаимодействует с РНК, входящей в состав Ш-мяРНП.
Вы изучаете процессинг гистоновых мРНК в клетках млекопитающих и
хотите узнать, зависит ли формирование их З'-конца от тех же
взаимодействий. Как показано на рис. 9-26,А, между З'-концами гистоновых
мРНК морского ежа и человека наблюдается поразительное сходство. Вы
показали, что ядерные экстракты клеток человека "правильно" расщепляют
меченый синтетический предшественник гистоновой мРНК. Более того, если
экстракт предварительно обработан нуклеазой для разрушения в нем РНК, он
теряет способность расщеплять добавленный после этого предшественник
гистоновой мРНК. Можно восстановить активность обработанного экстракта,
добавив к нему частично очищенную фракцию, содержащую мяРНП.
Для более детального изучения процессинга вы синтезируете
олигонуклеотиды ДНК, соответствующие области вокруг предполагаемого
участка взаимодействия гистонового предшественника с мяРНП. Один
олигонуклеотид содержит консервативную последовательность человека,
другой олигонуклеотид-эту же последо-
Рк. 9-26. Последовательность вунеотидов гистоновых РНК-щидшественников
(А), олиго-нуиеотиды ДНК (Б) и мяРНК (В) 'задача 9-31). А. Последователь-
I инвертированных повторов, способных образовать в молекуле
нественника шпилечную структуру, подчеркнуты стрелками.
'часток расщепления указан верти-[ стрелкой. Консервативный ток
подчеркнут линией на (А) (Б). В. т3С-триметил-кэп, харак-ный для U-PHK.
Буквой N значен неизвестный нуклеотид.
А. Гистоновая РНК-предшественник Человек
5' 4 з г
ACCCAAAGGCUCUWUCAGAGCCACCCAC UUAUUCCAACGMAGUAGCUGUGAUAAUU
Морской еж
5' I 3.
AAACGGCUCUUUUCAGAGCCACC ACACCCCCAAGfiMGAUUCUCGUUAAA
Б. Олигонуклеотиды ДНК
Человек 5' ACSaaaGTAGCTGTG 3*
Мышь 5' cGsaaaSAGOTGTT з1
Обобщенная 5' aaagaaagagc.tact з<
поел едо в ател ьность
В. и7-мяРНК человека
5' m3G-NNGUGUUACAGCUCUUUUAGAAUUUGUCUAGU.. 3'
154 Глава 9
Рис. 9-27. Нуклеотидные последовательности генов (i-глобина у разных
видов как области экзонов и интронов (задача 9-32).
вательность мыши и третий-обобщенную последовательной Рис. 9-28. Р;
полученную на основе сравнения всех известных подобных консе| генов
актин; вативных последовательностей у млекопитающих (рис. 9-26,1 9-33).
Гены Когда вы предынкубируете эти олигонуклеотиды с экстракта указывавши
в присутствии РНКазы Н (она разрезает РНК в гибрид тРанскРипщ' ДНК-РНК),
то процессинг предшественника полностью блок руется консервативными
