Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
York: Elsevier, 1985.
12-4 Сукцинилхолин, связываясь с ацетилхолиновым рецептором очень прочно,
не вызывает, однако, его конформационного изменения, которое необходимо
для открывания ионного канала и запуска мышечного сокращения. При этом
сукцинилхолин препятствует нормальному сокращению мышц, конкурируя с
ацетилхолином за связывание с рецептором и блокируя таким образом
действие ацетилхолина на мышцу. По этой причине сукцинилхолин относят к
антагонистам ацетилхолина.
12-5
A. Концентрацию инсулина в каждой из проб можно определить
непосредственно по калибровочной кривой:
Проба 1 1,1 пг/мл,
Проба 2 6,1 пг/мл,
Проба 3 2,7 пг/мл.
Б. Участок кривой, где точность определения наибольшая, расположен
между значениями 0,4 и 0,7 отношения (связанный лиганд)/ (свободный
лиганд). При отношении ниже 0,4 кривая становится слишком пологой, т. е.
большие изменения в концентрации инсулина вызывают малые изменения в
величине этого отношения.
B. Описанный метод определения человеческого инсулина работает и в том
случае, если антитела получены против свиного инсулина (при условии, что
для получения этих антител иммунизировали животное, а не человека). Коль
скоро свиной и человеческий инсу-лины обладают структурным сходством
(имеют общие антигенные детерминанты), - так что антитела против свиного
инсулина реагируют с человеческим-метод пригоден для измерения
концентрации инсулина человека. Правильность результатов, получаемых с
помощью РИА, решающим образом зависит от того, одинаково ли ведут себя
антиген в стандартных образцах и антиген в определяемых пробах. В
рассматриваемом примере и анализируемый, и стандартный образец - это
человеческий инсулин, поэтому метод можно применять. (Если бы антитела
для этого метода были получены от человека, они узнавали бы в основном ту
часть свиного инсулина, которая отличает его от человеческого. Такие
антитела практически не связывались бы с инсулином человека, и метод
оказался бы непригодным.)
Литература: Yalow, R.S. Radioimmunoassay: a probe for the fine
structure of biologic systems. Science 200,1236-1245, 1978
Межклеточная сигнализация 455
Просвет фолликула
Тиреоглобулин
А Тиреоглобулин
Тироксин
Кровоток
Рис. 12-17. Синтез и высвобождение
тироксина (ответ 12-7).
12-6
А. Поскольку период полураспада радиоактивного йода составляет
7 сут, каждые два его атома будут давать в среднем один распад в
неделю. Чтобы узнать требуемое количество меченого инсулина в
пикограммах, надо перевести величину 1000 имп/мин в число распадов за
неделю (и умножить на два, чтобы получить число атомов радиоактивного
йода), а затем вычислить массу для такого же количества молекул инсулина.
1000 имп/мин составляет 2,0 х 107 распадов (расп.) в неделю:
расп. ЮООимп 2 расп. 60 мин 24 ч 7 сут
-----=----------х---------х---------х------х------=
нед мин имп ч 1 сут нед
= 2,0-107 расп./нед.
Таким образом, 1000 имп/мин соответствует 4 х 107 атомов
радиоактивного йода. Масса такого же количества молекул инсулина будет
равна 0,76 пг:
7 моль 11466 г
Инсулин = 4 х 10 молекул х----------------------х---------х
6 х 10 молекул моль
1012пг х-------= 0,76 пг
Б. Чувствительность радиоиммуиного определения наиболее высока, когда
количества меченого и определяемого веществ в пробе равны. Следовательно,
при указанных допущениях минимальное количество немеченного инсулина,
которое можно обнаружить,-0,76 пг.
12-7 Выявление во внутриклеточных каплях предварительно помеченного
материала из просвета фолликула означает, что эти капли состоят из
материала просвета, поглощенного фолликулярными клетками. Перемещение
внутриклеточных капель с периферии вглубь клетки также согласуется больше
с поглощением материала, чем с его секрецией. Наличие у фолликулярного
тиреоглобулина маннозо-6-фосфатного остатка позволяет думать, что
поглощенный материал маркируется для направления в лизосомы, где
тиреоглобулин расщепляется с образованием тироксина. Механизм
высвобождения тироксина в кровоток неизвестен. Схема, суммирующая данные
о синтезе и высвобождении тироксина, изображена на рис. 12-17.
Заметим, что присутствие в молекуле тиреоглобулина остатка
маннозо-6-фосфата поднимает весьма любопытную проблему клеточной
биологии. Почему тиреоглобулин не попадает сразу в лизосомы, а вначале
секретируется в просвет фолликула? Ответа на этот вопрос пока нет. Во
всяком случае фосфорилирование манноз протекает, видимо, по обычному
механизму. Возможно, манно-зо-6-фосфатный сигнал могут маскировать другие
модификации белка, например присоединение сульфатированных тирозинов или
