Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
встраиваться в аксонему до того, как к ней присоединятся другие белки, то
в гаметах мутанта должны присутствовать в функциональном состоянии все
белки, кроме дефектного. Поскольку мутант рос на радиоактивной среде, эти
белки должны были включить метку. После слияния жгутик мутанта
Цитоскелет 445
мог восстановить подвижность в результате сочетания меченых
компонентов из гамет мутанта и немеченых компонентов из гамет дикого
типа. Единственным исключением был бы белок, кодируемый дефектным геном:
он мог появиться только из гамет дикого типа и соответственно не содержал
бы метку. В этих условиях радиоавтограф электрофоретической картины для
химерных жгутиков должен был быть таким же, как для жгутиков дикого типа,
за исключением одного недостающего пятна. Это недостающее пятно и
соответствовало бы продукту поврежденного гена.
Б. Анализ внутригенных ревертантов по второму сайту также позволяет
различить две эти возможности. Если измененный ген кодирует белок,
входящий в состав собранной аксонемы, то некоторые ревертанты (а именно
те, у которых изменено число заряженных аминокислот в белке) будут давать
распределения, где одно пятно смещено (обычно слегка влево или вправо от
нормального положения из-за влияния заряда на изоэлектри-ческую точку
белка). Если поврежденный ген контролировал синтез 17 недостающих белков,
то ни у одного из ревертантов картина не должна была меняться (так как ни
одного из составляющих аксонему белков эта мутация напрямую не
затрагивает). Этот подход менее однозначен, чем первый, поскольку
неизмененная картина не позволяет однозначно заключить, что дефектный ген
регулирует синтез других белков-возможно, что просто было проверено
недостаточно много ревертантов.
В целом два этих метода оказались весьма мощным средством
анализа жгутиковых мутантов. У большинства мутантов, включая pfl4, с их
помощью было выявлено прямое влияние мутаций на процесс сборки (т. е.
показано, что мутантные гены кодируют белки, образующие часть структуры
аксонемы). Более того, оба этих метода давали одинаковые результаты при
выявлении белка, кодируемого поврежденным геном: немеченое пятно при
анализе дикариона соответствовало смещенному пятну при анализе
ревертантов.
Литература: Luck, D. J. L. Genetic and biochemical dissection of
the eucaryotic flagellum. J. Cell. Biol. 98:789-794, 1984.
Микротрубочки цитоплазмы
11-21
A. колхицин
Б. центр организации микротрубочек (МТОС-microtubule-organizing
center)
B. динамическая нестабильность
Г. белки, ассоциированные с микротрубочками (MAPs-microtubu-le-
associated proteins)
Д. кинезин
11-22
A. Правильно.
Б. Неправильно. Быстро (в течение нескольких минут) блокируются
только те клетки, которые в момент добавления колхицина находятся на
стадии митоза.
B. Правильно.
Г. Правильно.
Д. Правильно.
446 Глава 11
Е. Неправильно. Динамическая нестабильность проявляется только у
цитоплазматических микротрубочек с некэпированными концами.
Ж. Правильно.
3. Неправильно. Посттрансляционным модификациям (тирозили-рованию и
ацетилированию) подвергается полимеризованный тубулин; обратные процессы
происходят на неполимеризован-ных субъединицах.
И. Неправильно. Микротрубочки в аксоне ориентированы лишь в одном
направлении. Движение везикул и органелл в обе стороны вероятнее всего
достигается благодаря работе двух белковых "моторов", перемещающих
частицы в противоположных направлениях.
К. Правильно.
11-23
A. Центросомы снижают критическую концентрацию, ибо служат центрами
нуклеации для роста микротрубочек. Центры нуклеа-ции облегчают
возникновение новых микротрубочек; кроме того, они предохраняют связанный
конец от деполимеризации, благодаря чему образовавшаяся микротрубочка
имеет больше шансов сохраниться. Если нет таких центров нуклеации,
возникновение новых микротрубочек идет гораздо труднее, и оба их конца
подвергаются распаду.
Б. Кривые образования микротрубочек в присутствии и в отсутствие
центросом различаются по форме, так как в качестве критериев
полимеризации в этих двух случаях использовали разные по своей природе
параметры. В отсутствие центросом (рис. 11-17, А) о полимеризации судили
по общему количеству образовавшегося полимера, которое зависит только от
концентрации добавленного тубулина. Это количество с ростом концентрации
тубулина также будет расти-линейно и неограниченно. В присутствии
центросом (рис. 11-17, Б) критерием полимеризации служило число
микротрубочек, приходящихся на одну центросому. Поскольку число центров
нуклеации на каждой центросоме ограничено (примерно по 60 центров в
данном эксперименте), при высоких концентрациях тубулина наступает
насыщение.
B. Концентрация димеров тубулина, равная 1 мг/мл, соответствует
концентрации тубулина, равной 9,1 мкМ.
1мг тубулина ммоль тубулина 1000 мл
