Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
Сефадекс Хорошие Низкая Умеренная
Агароза " Умеренная Очень высокая
Сшитая глицерином десульфати-рованная агароза Незначительная
" "
Сшитая глицерином гидроксили-рованная агароза " То же
Сшитая дивинилсульфоном агароза Отличные 5> "
а Оценка дана в предположении, что первоначальное набухание имело место в
водном (r) Гидроксилирование полнфенолами приводит к продуктам, которые
легко окисляются
рение областей применения нерастворимых носителей. Если в настоящее время
каким-либо носителем пренебрегают из-за какого-то нежелательного его
свойства, он может стать лучше после подходящей модификации. Табл. 8.11
представляет собой как бы руководство для выбора матрицы; она
опубликована Поратом и Кристиансеном [57]. Из таблицы, например, хорошо
видно, что сшивание дивинилсульфоном значительно улучшает фильтрующие
свойства агарозы. Специфические сорбенты, поставляемые в 1976 г. фирмой
Pharmacia, уже приготовлены из сефарозы CL, т. е. из агарозы, сшитой 2,3-
дибромпропанолом и десульфирован-ной щелочным гидролизом в
восстановительных условиях. Кроме того, например, в случае октил- или
фенил-сефарозы CL-4B ок-тильная и фенильная группы связаны с
моносахаридным звеном матрицы агарозы через незаряженные, химически
устойчивые эфирные связи. Эти сорбенты, несомненно с хорошими
фильтрующими свойствами, с отличной проницаемостью и минимальной
неспецифической адсорбцией, могут применяться без риска их разрушения или
отщепления аффинного лиганда. Они химически стабильны при pH 3-14, могут
быть автоклавированы при 120°С
Нерастворимые носители и методы иммобилизации лиганда____________227
Таблица 8.It
выбора матрицы
Неспецнфмчсская адсорбционная емкость Химическая устойчивость
Набух аемость в органических растворителях Плотность
рН>12 рН<3 вводимых реакциоинослособ-ных групп
Очень высокая Очень низкая Очень высокая Низкая
Низкая Низкая (кроме HF) Умеренная ? Высокая
Очень высокая Очень высокая - Умеренная
Умеренная - Го же Умеренная Плохая Высокая
высокая Низкая " " " " "
" " " Низкая Хорошая Умеренная
Очень низкая " " Умеренная Очень хоро- "
Го же Низкая6 " шая3 " Высокая
" " " " " Умеренная
растворе, при высоких pH,
и pH 7, и с ними можно работать в органических растворителях.
Однако вопрос их практического использования в больших масштабах не решен
еще с экономической точки зрения. Напротив, разработка таких носителей,
как стекло и керамические материалы, более целесообразна именно для
практического использования. К их недостаткам относятся относительно
высокая неспецифическая сорбция, а также чувствительность к щелочному
гидролизу. Однако соответствующая модификация или обработка поверхности в
значительной степени позволяет преодолеть эти недостатки. Ввиду того что
целлюлоза является одним из наиболее дешевых носителей, она большей
частью используется экспериментаторами, интересующимися практическими
приложениями. Ее недостатком является то, что она часто обнаруживает
значительную неспецифическую сорбцию и слабую проницаемость раствора
через матрицу, что не легко поддается управлению [57]. Биоспецифические
сорбенты, основанные на целлюлозе, в отличие от других сорбентов очень
часто обнаруживают отклонение от поведения, ожидаемого на основании
степени замещения. Следо-вательно, замещения затрагивают, очевидно,
участки, простран-
228
Глава 8
ственно недоступные для образования комплексов с макромолекулами.
Относительно плохие фильтрующие свойства можно улучшить, соответствующим
образом модифицировав матрицу или приготовив смесь с инертным
нерастворимым носителем, например с таким, как стеклянные шарики. Хотя
целлюлоза может атаковаться бактериями или грибами, при создании
определенных условий она проявляет значительную устойчивость.
В табл. 8.11 отсутствует сополимер этилена с малеиновым ангидридом,
потому что из-за высокого содержания карбоксильных групп он постепенно
все реже используется в аффинной хроматографии, а также для получения
иммобилизованных ферментов, как это следует из табл. 11.1. Из табл. 11.1
также ясно видно, что столь же относительно редко используются
полиакриламидные гели. Они действительно обладают рядом хороших свойств,
но их устойчивость в щелочной среде плохая. При щелочном гидролизе и в
сильно кислых средах образуются свободные карбоксильные группы. По-
видимому, имеются очень хорошие перспективу для применения
оксиалкилметакрилатных гелей; их производство все еще не развито в полной
мере, однако с ними накоплен ценный опыт. Использование декстриновых
гелей уменьшилось в связи с расширением применения гелей агарозы (за
исключением некоторых специальных случаев); в настоящее время гели
агарозы являются наиболее широко применяемыми, как об этом можно судить
по данным табл. 11.1. Поэтому в этой главе им уделено большое внимание.
Высокая проницаемость нерастворимых носителей, которая является
предпосылкой легкости образования специфических комплексов
высокомолекулярных соединений, не является достаточным условием для
