Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
плазмы крови и продуктов плазмы были приготовлены Шармом и Уонгом [189]
путем иммобилизации сыворотки козы с антителами к антигену сывороточного
гепатита на сефарозе 2В после активации бромцианом. Удаление веществ из
крови аффинной хроматографией изучено в дальнейшем Плотцем и др. [909] и
Шаршмидтом и др. [1013]; для удаления билирубина и других веществ,
связывающихся альбумином, они использовали альбумин, присоединенный к
биогелю А-Бгп.
Терман и др. [1166] использовали БСА, иммобилизованный на микрокапсулах,
для удаления антител против БСА из крови собаки.
Камеру для мнкрокапсул изготовляли из стеклянной цилиндрической трубки
(8X2,5 см) с фильтрами в 40 меш из нержавеющей стали на концах. Эту
камеру заполняли -"400 микрокапсулами диаметром 1,0-1,1 мм, а затем
соединяли с перистальтическим насосом с помощью полиэтиленовых трубок.
Капсулы промывали 2 л воды при 30 °С в течение 60 мин; гидролизовали 500
мл 3 М соляной кислоты при циркуляции в течение 60 мин при 30 °С и
скорости потока 30 мл/мин, а затем капсулы опять промывали водой. '12,5%-
ный раствор глутарового альдегида в 0,1 М боратком буфере (pH 8,3)
циркулировал через систему в течение 15 мин со скоростью 30 мл/мин при 30
°С, а затем капсулы промывали 0,1 М боратным буфером (pH 8,3) при 30 °С.
После замены трубок добавляли раствор 200 мг БСА, содержащий в качестве
маркера 0,2 мкг [12iI] БСА, в 0,9%-ном растворе хлорида натрия и этот
раствор циркулировал через калеулы в течение 30-60 мин. Наконец, через
капсулы циркулировали 200 мл 10 мкМ раствора МагБгСЬ со скоростью 200
мл/мин. После промывания 0,9%-ным хлоридом натрия до отсутствия в
промывных водах 1251 (~500 мл) капсулы в растворе переносили в
силиконизированную камеру для использования in vivo. Таким образом с
микрокапсулами связывалось 32,4-34,5 мг БСА.
Схема экстракорпоральной системы in vivo показана на рис, 11.6. Собак
анестезировали пентобарбиталом натрия; артерию и вену бедра присоединяли
с помощью полиэтиленовых трубок широкого диаметра. Гепарин натрия (3
мг/кг) вводили внутривенно и катетеры артерии н вены бедра соединяли с
насосом и камерой с микрокапсулами. Камеру перед использованием
силиконизировали. Трехходовой кран позволял прерывать кровоток через
камеру через 7-12 мин, чтобы предотвратить сопротивление потоку через
микрокапсулы, возникающие из-за засорения фильтров. Камеру соединяли с
капельницей, а затем с веной бедра. Перед инъекцией антител
гепаринизированная кровь 20 мин циркулировала через экстракорпоральную
систему. Скорость потока поддерживали 200 мл/мнн во время всей процедуры.
Образцы крови отбирали из венозной линии и анализировали на содержание
антител через различные интервалы времени,
Кроличью антисыворотку против БСА и человеческого сывороточного альбумина
(ЧСА) вводили анестезированным собакам одновременно, при разбавлениях,
при которых антисыворотха связывает 95% соответствующих ей антигенов. Для
анти-БСА- это разбавление 1 : 520, а для анти-ЧСА- 1 : 270. После
уравновешивания в течение 12 мин микросферы БСА вводили в
экстракорпоральное кровообращение. Специфическое уменьшение количества
БСА-связываю-щих антител четырех собак обнаружено в течение первых 15 мин
после введения микрокапсул БСА, в последующие 60 мнн содержание антител
уменьшалось значительно меньше. За те же интервалы времени количество
анти-ЧСА оставалось постоянным. Для доказательства того, что наблюдаемое
снижение связывающей способности БСА не является следствием отщепления
БСА от микрокапсул в ходе эксперимента, жизненно важные органы и
сыворотку крови собак анализировали на присутствие 12SI в конце
экспериментов. Никакой суще-
Примеры применения аффинной хроматографии
385
ственион радиоактивности в органах и сыворотке собак не найдено. Перед й
после экстракорпоральной циркуляции через мпкрокапсулы БСА определяли ге-
матокрнт и число лейкоцитов у собак; найдены почти одинаковые значения.
Только у одной из четырех собак обнаружено уменьшение лейкоцитов. После
завершения экспериментов микрокапсулы обследовали на содержание
тромботического материала или клеточных обломков, которые, однако, не
были обнаружены.
Рис. 11.6. Схема экстракорпоральной системы кровообращения [1166].
По-видимому, иммуносорбенты в будущем могут быть использованы в медицине.
Найлоновые микросферы имеют определенные свойства, которые позволяют
применять их в экстракорпоральных системах: большая площадь поверхности
позволяет связывать необходимое количество белков; они обладают
минимальной токсичностью в отношении организма-хозяина, которая может
быть отнесена к химической инертности микрокапсул, и, наконец,
устойчивость их структуры уменьшает опасность эмболий.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Abe S., Nagai Y., Biochim. Biophys. Acta, 278, 125-132 (1972).
2. Abdon N. Richter М., J. Exp. Med., 130, 141-163 (1969).
3. Handbook of Radioimmunoassay, G. E. Abraham (Ed.), Marcel Dekker, New
York, 1977, pp. 1-822.
