Биология в 3 томах. Tом 3 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003687-3
Скачать (прямая ссылка):
Как уже отмечалось, минисателлитные последовательности разных индивидуумов имеют различную длину. Зонд связывается с миниса-теллитами, которые у разных индивидуумов обнаруживаются в разных полосах на фильтре, поскольку их длины различны. Для каждого индивидуума рисунок (распределение минисател-литов) является характерным и поэтому называется дактилоскопическим отпечатком (рис. 25.34). Если зонд распознает и связывается с несколькими типами минисателлитов по всему геному, его называют мультилокусным зондом, и на радиоавтографе он будет давать множество полос. Чем больше полос, тем более уникален рисунок. Вероятность случайного совпадения четырех по-
ММА им. И.М. Сеченова
лос у двух людей составляет примерно I на 250, тогда как для 20 полос она меньше — I на 10|2(на Земле около 4,5- І О9 человек).
Мультилокусные зонды дают наилучший результат при использовании чистой, беспримесной ДНК. Однако судебные медики редко работают на свежем материале хорошего качества. Как правило, образцы чем-то загрязнены, например почвой или бактериями. Часто требуется более «мощный» метод. Этого достигают с помощью однолокусного зонда. Такой зонд можно использовать при работе с небольшими участками ДНК (например, с частично разрушенной ДНК), а также с малым количеством материала. Зонд распознает лишь одиночную короткую повторяющуюся последовательность, которая уникальна для одного минисателлита и поэтому обнаруживается только на определенной паре гомологичных хромосом. При рестрикции образуются два характерных фрагмента для каждого индивидуума, и, следовательно, на радиоавтографе появятся две полосы, одна материнского и одна отцовского происхождения (рис. 25.35). Если используют два однолокусных зонда, то появится четыре полосы; если три, то — шесть, и т. д. Если требуется очень высокая достоверность в определении различий между двумя индивидуумами, то нужно использовать большое количество зондов (см. ниже). Этот метод называют генотипи-рованием, а получаемый при этом профиль используют в судебной экспертизе чаще всего.
Метод можно сделать еще более чувствительным, если увеличить количество ДНК с помощью полимеразной ценной реакции (ПЦР). Это означает, что профиль ДНК можно получить, используя минимальную по объему пробу ДНК (например, выбитый с помощью дырокола кусочек облизанной подозреваемым почтовой марки). Любой человек, оставивший частичку перхоти или чихнувший на месте преступления, может стать подозреваем ьгм!
Приложения
Ту же роль, что в начале 1900-х годов сыграла дактилоскопия, совершившая революционный переворот в судопроизводстве, в наше время играет метод генетической дактилоскопии. ДНК обычно выделяют из небольшого количества биологического материала, найденного на месте преступления, например пятен крови, волос или
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3
Прикладная генетика
267
Мать
Отец
Минисателлит с десятью повторяющимися последовательностями
Хромосої
Мейоз и оплодотворение
Сайт рестрикции. Подбирается рестриктаза, которая разрезает ДНК с обеих сторон от минисателлита
Ребенок 1 геиенок z
Возможные І
дети
геиеніж м-
6 12
Мать
10
Отец
Профили ДНК
Разделение фрагментов по размерам с помощью гель-электрофореза
Рис. 25.35. Наследование минисателлитов и разнообразие получаемых при этом профилей ДНК. Популяция в целом характеризуется огромным разнообразием длин минисателлитов, поэтому вероятность того, что у двух индивидуумов будут одинаковые профили ДНК, очень мала (см. текст).
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 3
268 Глава 25
Рис. 25.36. Генетическая дактилоскопия крови жертвы, спермы (образец) и крови подозреваемых.
слюны. В случаях изнасилования используют сперму (рис. 25.36). Метод для определения отцовства стал рутинным. На рис. 25.37 приведен пример использования профилей ДНК при решении спорного вопроса об отцовстве.
25.8. Посмотрите на рис. 25.37.
Кто из детей данной матери является сыном или дочерью предполагаемого оща?
M Pl Р2 РЗ Р4 О
Рис. 25.37. Профили ДИК людей, участвующих в споре об отцовстве ('M — мать, Р— ребенок, О — отец).
Метод генетической дактилоскопии впервые был использован в судебной экспертизе в Великобритании в 1986 г. В 1983 г. в деревне недалеко от Лестера была найдена изнасилованная и убитая школьница; в 1986 г. был найден второй труп. Подозреваемый признался во втором преступлении, однако полиция предполагала, что он виновен и в преступлении 1983 г. Полиция попросила сотрудника Лестерского университета Джеффриза провести дактилоскопию ДНК из образцов спермы, взятых на местах двух преступлений и ДНК из пробы крови подозреваемого. Результаты анализа показали, что человек не был виновен ни в одном из преступлений! Исследовали всех местных мужчин (около 1500 человек), но снова не получили положительного ответа. В конце концов убийцу поймали в результате случайно подслушанного разговора в пивной. Дактилоскопический анализ ДНК подтвердил его виновность. Однако примерно в 30% случаев метол генетической дактилоскопии не дает соответствия тестируемой ДНК по профилю ДНК, обнаруживаемой на месте преступления.
