Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Том 1 - Свердлов Е.Д.
ISBN 5-02-002753-7
Скачать (прямая ссылка):
Ы2-253 Y17173 329 ND-IV V00662 194 99
hi 2-254 Y17174 243 16S rRNA V00662 242 98
Ы2-264 Y17176 259 ND-IV V00662 246 98
Ы2-274 Y17175 196 COX-11 V00662 180 97
Ы2-378 Y17177 95 CYTb V00662 78 92
Ы2-383 Y17178 298 ND-IV V00662 296 98
Ы2-494 Y17179 264 AS 6 V00662 264 95
Ы2-498 Y17180 265 ND-IV V00662 208 98
Ы2-500 Y17170 227 16S rRNA V00662 225 99
Ы2-501 Y17170 302 16S rRNA V00662 299 99
Ы2-502 Y17170 205 16S rRNA V00662 203 99
hl2-503 Y17170 274 16S rRNA V00662 271 99
hl2-504 Y17170 255 16S rRNA V00662 252 99
Сокращения. AS - АТФ- синтаза, СОХ - цитохром-с-оксидаза, CYT - цитохром, ND - НАДН-де-
гидрогеназа, INF-ind - ген, индуцируемый интерфероном, Я-lIg - легкая цепь иммуноглобулина.
ды (EST) и (3) имеющие гомологию с описанными ранее генами. При сравнении лимфомоспецифических генов CL и IL выяснилось, что среди них есть как общие, так и специфические для отдельных лимфом.
Далее, с целью более полного анализа спектра высокоэкспрессирую-щихся генов в этих двух лимфомах человека и для доказательства того, что обнаруженные нами различия в спектре высокоэкспрессирующихся генов
6*
163
Таблица 6. Гены, характеризующиеся повышенным уровнем экспрессии в CL по сравнению с IL человека (Tarantul et al., 2001; Ненашева и др., 2001) ‘
Клон Секвенированный фрагмент (п.н.) Родственный ген или кДНК Регистрационный номер Сходство
hss1-204 137 ND-J V00662 83
hss1-206 107 Неизвестен - Нет
hss 1-209 188 Неизвестен - Нет
hssl-219 144 set M93651 96
hss 1-221 198 ND-IV V00662 100
hss 1-225 105 XlgL X51755 100
hss1-250 143 set M93651 97
hss 1-254 161 ND-IV V00662 98
hss1-255 171 set M93651 97
hss1-257 165 set M93651 98
hss 1-301 133 IFN-ind U22970 100
hssl-316 177 IL4R X52425 94
hss 1-328 128 TAP2 U07844 95
hssl-342 105 a-myb X66087 100
Сокращения. IL4R — рецептор интерлейкина 4, ТАР2 — ABC транспортер 2.
являются реальными, а не результатами ограниченных возможностей использованного метода, была проведена дополнительная вычитающая гибридизация с использованием РНК CL как трейсера и РНК IL как драйвера. Результаты, представленные в табл. 6, свидетельствуют о том, что обнаруженные нами на первом этапе различия в спектре высокоэкспрессирующихся генов между двумя типами лимфом действительно имеют место. Кроме этого, был выявлен ряд новых высокоэкспрессирующихся в CL генов. Интересно, что полученные нами данные по сравнительному анализу CL и IL хорошо совпали с результатами масштабного анализа, проведенного одновременно с нами с использованием новой техники на базе микрочипов (Alizadeh et al., 2000). Обнаруженный нами повышенный уровень транскрипции генов в CL по сравнению с IL, таких как онкогены set и a-myb, IL-4R, ТАР2, был выявлен для ряда DLBCL в результате анализа, проведенного с использованием микрочипов. Все лимфомы, в которых было обнаружено повышение экспрессии описанных нами генов, относились к большому подтипу DLBCL, содержащих клетки, схожие с В-лимфоцитами центра размножения. Эти данные являются еще одним подтверждением специфичности выявленного нами спектра генов, высокоэкспрессирующихся в CL.
В CL человека в первую очередь обратил на себя внимание высокий уровень экспрессии “слитого” гена иммуноглобулин-s^ (получено несколько идентичных клонов кДНК, содержащих в пределах одной молекулы последовательности легкой цепи иммуноглобулина и гена set). Ранее в литературе не было указаний на участие онкогена set в лимфомогенезе. Секве-нирование кДНК, а также детальный ПЦР-анализ (рис. 55) и блот-гибриди-зация подтвердили, что активация этого онкогена в CL связана скорее всего с хромосомной транслокацией между 9 и 22 хромосомами, в результате которой образуется слитый ген Ig-set (Николаев и др., 1999; Tarantul et al., 2001b).
164
12 3 4 5 6
Рис. 55. ПЦР-анализы, выявляющие наличие слитого транскрипта (А) и гена (Б) lg-set в CL
А - ПЦР-анализ, выявляющий слитую IgLlset кДНК. ПЦР проводилась с суммарной кДНК, синтезиро ванной на мРНК контрольных В-лимфоцитов (дорожка 1), IL (дорожка 2), CL (дорожка 3) и кДНК клона hll-98 как положительный контроль (дорожка 4). Дорожка 5 — маркер молекулярных весов (pBR322, рестрицированная эндонуклеазой Alul). Б - ПЦР-анализ, выявляющий слитую последовательность IgLlset в геномной ДНК. Реакция проводилась с геномными ДНК из нормальных В-лимфоцитов человека (дорожка 1), клеток нормальной селезенки человека (дорожка 2), CL (дорожка 3) и IL (дорожка 4). В качестве положительного контроля служила кДНК клона hll-98 (дорожка 5). Дорожка 6 - маркер мо-леулярных весов (pBR322. рестрицированная эндонуклеазой Alul)
Вместе с тем в результате проведенного исследования на лимфомах человека выяснилось, что к HIV-ассоциированному лимфомогенезу могут иметь отношение такие общие для двух лимфом высокоэкспрессирующиеся гены, как гены отдельных субъединиц белков, участвующих в процессе окислительного фосфорилирования (ОФ).
В случае лимфомогенеза у HIV-инфицированных людей пока можно говорить лишь об ассоциации между вирусной инфекцией и злокачественным перерождением. Однако наличие причинно-следственной связи между образованием лимфом у обезьян и инфицированием их SIV, по-видимому, является установленным фактом, так как от 15 до 40% искусственно инфицированных SIV животных содержат лимфомы (Feichtinger et al., 1990, 1992; Hannig et al., 1998). Следует отметить, что одновременно в Солее 90% лимфом у обезьян присутствуют вирусы, подобные человеческому EBV (Blaschke et al., 2001).
