Сельскохозяйственная биотехнология - Шевелуха Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Р.Г. Стайгмиллер и P.M. Мур (1984) в своих опытах использовали ту же систему оплодотворения ооцитов в яйцеводе овцы, но созревание ооцитов проводилось in vitro вне фолликулов. Ооциты культивировали в среде ТСМ 199 с 10%-ной инактивированной фетальной сывороткой с добавлением гонадотропинов (ЛГ и ФСГ) и эстадиола — 17рв. Эмбрионы извлекали из матки °вцы через 10—12 дней. В результате до 37,2% ооцитов разви-
вались до стадии бластоцисты. Пересадка другому реципиенту сопровождалась развитием эмбрионов до рождения нормального потомства.
Развитие эмбрионов овец с 8-клеточной стадии до вылупившейся бластоцисты впервые получено в среде Виттена с добавкой БСА (Р.Ф. Питерс и др., 1977).
В опытах Н. Грозета и др. (1987) овулировавшие ооциты (п-87) и ооциты из яичника (п-99), которые созревали in vitro, оплодотворяли in vitro эякулированными спермиями, капацити-рованными в течение 8 ч в модифицированной среде ДМ с добавлением ЮмМ буфера Хепеса. Получена высокая оплодотво-ряемость — 75,8% овулировавших ооцитов и 62,6% ооцитов из яичника. Хирургическим путем переносили 2—4-клеточные эмбрионы в яйцеводы ложнобеременным кроликам. Через 3 дня 42 овулировавших ооцита и 15 ооцитов из яичника извлекали из яйцевода кролика. Из них соответственно 26 и 10 эмбрионов дробились не меньше одного раза. После инкубации in vitro 20 овулировавших ооцитов и 9 извлеченных из яичника были пересажены хирургическим путем в матку, соответственно 7 и 4 ов-цам-реципиентам. Суягность наступила у 4 и 2 овец, из которых у 3 и 1 сохранилась меньше 3 мес. Первый ягненок родился от оплодотворения in vitro овулировавших ооцитов. Шесть эмбрионов, полученных из овулировавших ооцитов, и 10 из яичников перенесены прямо в яйцеводы соответственно 2 и 3 овец. Развивалось две суягности из яичниковых ооцитов.
Свиньи. К настоящему времени не известны какие-либо данные об оплодотворении in vitro ооцитов свиней. Вместе с тем некоторые исследователи наблюдали проникновение спер-миев в ооциты свиней после созревания их in vitro и пересадки осемененной эстральной свиньи, но ни один ооцит не продолжал развитие и у многих из них проявилась полиспермия.
Другие авторы сообщили о нормальном оплодотворении развитии в аналогичной системе ооцитов, полученных из яичников свиней, обработанных ХГ за 12 ч до ожидаемой овуляции Можно полагать, что только после полного созревания ооцита я организме животного происходит блокирование полиспермии нормальное оплодотворение и дальнейшее развитие эмбрионои этого вида.
Более успешные результаты достигнуты при культивировании ранних эмбрионов свиней in vitro. Так, после 48 ч культивирования 1—4-клеточных эмбрионов свиней и последующей их хирургической пересадки были получены беременности у 2 из 13 свиней. После культивирования 8-клеточных эмбрионов в течение 48 ч до стадии бластоцисты и затем пересадки 19 свинь-236
ям-реципиентам 10 животных были беременны во время убоя через 21 день, но только 51 из 229 эмбрионов были представлены живыми плодами.
4.3. КЛЕТОЧНАЯ ИНЖЕНЕРИЯ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ
Число потомков от одной особи, как правило, у высших животных бывает небольшим, а специфический комплекс генов, определяющий высокую продуктивность, возникает редко и в последующих поколениях претерпевает значительные изменения.
Вместе с тем известно, что ядро соматической клетки обладает полной генетической информацией о данном организме, и если создать условия для реализации этой информации, то можно получить практически неограниченное число генетических копий (клонов) определенной особи. Однако, поскольку ядра большинства соматических клеток находятся в дифференцированном состоянии, то эту задачу на данном этапе решают, используя эмбриональные клетки на определенной стадии развития зародыша, когда еще не произошла их дифференциация. Пересадка ядер (бластомеров) в зрелые ооциты дает такую возможность, потому что цитоплазма ооцитов содержит специфические факторы, способные репрограммировать пересаженное ядро и запускать программу развития нового эмбриона.
Получение однояйцевых близнецов. Получение однояйцевых близнецов имеет большое значение для животноводства. С одной стороны, увеличивается выход телят от одного донора, а с другой — появляются генетчески идентичные двойни. Получение идентичных двоен в большом количестве могло бы облегчить оценку быков по качеству потомства, уменьшить стоимость спермопродукции, ускорить и удешевить тестирование препаратов и упростить исследования в области кормления животных.
Возможность микрохирургического разделения эмбрионов млекопитающих на ранних стадиях развития на две и более части, чтобы каждая в последующем развивалась в отдельный организм, была высказана несколько десятилетий назад. Первое потомство однояйцевых мышей было получено из механически изолированных бластомеров двухклеточных эмбрионов в 1970 г. Используя ту же технику разделения, но с применением метода заключения в агар С.М. Вилладсен (1979) описал получение однояйцевых двоен у овец разделением 2-клеточных эмбрионов. Он использовал при этом метод заключения в агар эмбриона с поврежденной зоной пеллюцидой и лигатированный
