Физиологически активные полимеры - Платэ Н.А.
Скачать (прямая ссылка):
заметной иммуногенности и обладал ферментативной активностью [135] и был использован как противоопухолевое средство [136].
Сшивание трипсина с альбумином человека и свойства конъюгатов как потенциальных тромболитических агентов изучены в работах [137,138]. Сохранение ферментативной активности зависело от условий реакции, причем активность снижалась с увеличением концентрации сшивающего агента, pH и продолжительности реакции, т. е. при многоточечных сшивках и образовании массивных конгломератов (М « 2 млн.). Блокирование свободных альдегидных групп приостанавливало снижение активности. Оптимум pH конъюгатов оказался не смещенным, а взаимодействие с соевым ингибитором снижено в результате влияния одноименно с ним заряженной альбуминовой части конъюгата. Активность по казеину была лишь 17 % для невосстановленного конъюгата и 84 % для восстановленного боро-гидридом. Повышение физиологической активности белка при снижении концентрации сшивающего агента (глутарового альдегида) наблюдалось и в других случаях.
Сшивание террилитина или трипсина с сывороточным альбумином человека альдегидным методом приводит к снижению сродства обоих ферментов к ингибиторам протеиназ, присутствующим в крови [139]. Константа ингибирования для террилитина увеличивается в 3—4 раза, а для трипсина — на 2—3 порядка. Время рекальцификации крови не меняется для конъюгата террилитина, для конъюгата трипсина коагулирующая активность снижается. Оба конъюгата обладают пониженной острой токсичностью, по-видимому, за счет уменьшения сродства террилитина к его ингибитору — а-макроглобулину, а для трипсина — за счет снижения коагулирующей активности.
Сшитый глутаровым диальдегидом конъюгат а-1,4-глюкози-дазы, гомологичного альбумина и иммуноглобулина против ге-патоцитов (М конъюгата ~ 106) после внутривенного введения показал преимущественное связывание с гепатоцитами по сравнению с отдельными его компонентами, которые попадали в основном в купферовы клетки [140]. Такой конъюгат может быть использован для снижения уровня гликогена при патологических состояниях (болезнь Помпе).
Аспарагиназа была переведена в гомоконъюгат с помощью различных сшивающих агентов — глутарового диальдегида, ди-метилового иминоэфира субериновой кислоты и реагента Вудворда К, а также присоединена к диальдегиддекстрану (с последующим восстановлением) [141]. В ходе получения конъюгатов отмечено образование как внутри-, так и межмолекуляр-ных сшивок, причем активность фермента снижалась с увеличением степени прохождения реакции. Время полувыведения конъюгатов из кровяного русла составило 28 ч против 7,5 ч для исходного фермента при внутрибрюшинном введении. Время
уменьшения аспарагиназной активности плазмы вдвое доходило до 190 ч для декстрановых конъюгатов и 15—39 ч для белковых гомоконъюгатов, полученных разными методами, против
11 ч для нативного фермента.
Во многих случаях показано, что увеличение размеров макромолекул белков путем сшивания повышает их биологическую активность. Так, сшивание агглютинина бобов сои в высокомолекулярный полибелок глутаровым диальдегидом вызывает 100—200-кратное увеличение гемагглютинирующей активности на эритроцитах человека [142]. Митогенная активность одного из гемагглютининов оказалась в несколько раз выше для тетрамерных макромолекул, чем для димерных [143]. По-лимеризованный глутаровым диальдегидом антиген Е пыльцы крестовника более антигенен, чем мономерный белок [144]. Сродство протаминов, имеющих поликатионный характер, к клеточной поверхности повышается при их полимеризации с помощью водорастворимого карбодиимида [145]. Параллельно этому растет и противоопухолевая активность, что вообще характерно для поликатионов. Для других ферментов, например для урокиназы, при гомо- или гетероолигомеризации сохраняется до 100 % каталитической активности в широком интервале молекулярных масс [146]. С ростом М увеличивается стабильность конъюгатов урокиназы, которые длительно циркулируют в кровяном русле и более активны при лечении кровоизлияний у животных, чем исходный фермент. Образование конъюгатов, которые имеют большое число детерминантных групп и способны к множественному взаимодействию с поверхностью клетки, может приводить к увеличению их захвата клетками разных типов. Это показано на примерах сшитой рибонуклеазы [147] и сшитых антител [148].
Одну из наиболее интересных и перспективных групп оши-тых белков представляют собой иммунотоксины — конъюгаты, содержащие токсин или его фрагмент, связанный с антителом [148, 149]. Иммунотоксины предназначены для уничтожения строго определенных по иммунологической специфичности клеток, обычно опухолевых, диссеминированных в организме (например, лейкозных). Они представляют собой сочетание ФАВ со средством его целенаправленного транспорта. В качестве токсического начала обычно используют либо дифтерийный токсин, который не годится для клинического использования в связи с наличием у человека антител к нему, либо рицин, абрин и другие токсины растительного происхождения. Рицин, как и абрин, состоит из двух цепей: токсической A-цепи и связывающей с клетками В-цепи. Последняя представляет собой лектин, который специфически взаимодействует с галактозасодержащими гликопротеинами или гликолипидами клеточной поверхности. Цепь А рицина способна достигать цитоплазмы внутри клетки, по-видимому, в результате рецептор-медиируемого эндо-
