Цитологія, гістологія, ембріологія - Новак В.П.
Скачать (прямая ссылка):
Мікротомним ножем, у якого попередньо відрегульований кут нахилу, готують зрізи товщиною 15—20 мкм.
Декілька перших зрізів викидають, а всі наступні збирають у чашечку з проточною водою для подальшої обробки.
Обробка зрізів проводиться за такою схемою:
1. Фарбування в гематоксиліні — 2 хв.
2. Промивка в проточній воді — 1 хв.
3. Промивка в дистильованій воді — 1 хв.
4. Фарбування в еозині — 5 хв.
5. Промивка в дистильованій воді — 1 хв.
6. Зневоднення в спиртах (96° і 100°) — по 2 хв у кожному.
7. Освітлення у ксилолі — 3 хв.
8. Заливка у бальзам і монтаж препарату.
Виготовлення препаратів із целоїдинових зрізів
Невеликі шматочки органів від щойно забитої тварини кладуть у фіксуючу рідину, яка повинна мати властивість швидкого проникнення в тканини, не викликаючи в них змін.
Рецептів виготовлення фіксаторів дуже багато і використовуються вони залежно від характеру об'єкта та мети дослідження.
Здебільшого зафіксовані шматочки органів промивають спершу в проточній, а потім у дистильованій воді. Потім їх ущільнюють у спиртах зростаючої концентрації — 70°, 90°, 100°.
*Цитологія, гістологія, ембріологія *
Для заливки органів користуються тим целоїдином, що є у продажу. Частіше для цього використовують кіноплівку. При цьому емульсію заливають гарячою водою, плівку висушують, дрібно нарізають, потім заливають на 1 добу хлороформом — для відокремлення домішок спирту та ефіру. Для кращого проникнення у тканини готують кілька розчинів целоїдину різної концентрації — 8, 10 та 12%-ний. У цих розчинах попередньо зневоднені шматочки органів витримують від 2-х до 7-ми діб, залежно від щільності та величини шматочка. Потім шматочки органів заливають густим целоїдином і залишають їх під ковпачком на 2-3 доби. Коли целоїдин стає твердим, шматочки органів нарізають разом із целоїдином і наклеюють їх на дерев'яний кубик.
Шматочки органів, наклеєні на дерев'яних кубиках-блоках, зберігають у 70°-ному спирті.
При виготовленні гістологічних зрізів блоки закріплюють на спеціальному столику мікротома. Мікротомний ніж встановлюють у косому положенні (35°). Блок і ніж змочують 70°-ним спиртом і готують зрізи.
Оптичні прилади
Лабораторія мікроскопічного аналізу
1. Мікроскопи люмінесцентні серії "Люмам" застосовуються для дослідження мікробіологічних, гістологічних та деяких інших об'єктів у світлі їх видимої люмінесценції, що збуджується зелено-синьо-фіолетовою ділянкою спектра, а також ультрафіолетовим промінням із довжиною хвилі більше 360 нм. Існують різні модифікації в серії "Люмам": робочі моделі — "Люмам Р-1", "Люмам Р-2", "Люмам Р-3" та три дослідні моделі — "Люмам І-І", "Люмам І-2", "Люмам І-3". Моделі "Лю-мам" дозволяють спостерігати та фотографувати об'єкти у світлі люмінесценції за допомогою різноманітних засобів. Кожна модель має свою технічну характеристику та збільшення від 10 разів до 30. До їх складу входять: набір об'єктивів, окулярів, фотоокулярів, світлофільтрів та інших пристосувань. Принцип
19
*Цитологія, гістологія, ембріологія *
20
дії мікроскопів серії "Люмам" базується на використанні явища люмінесценції об'єктів, яка виникає під дією проміння певного спектрального складу (див. додаток рис. 3).
У "Люмам-ІК" досліджуються об'єкти з природною люмінесценцією. При проходженні UV-проміння тканини здатні висвічуватись. Штучна люмінесценція — це люмінофори, які широко використовуються в гістологічних дослідженнях. Досліджуються живі бактеріальні структури, визначаються тканини, які не здатні адсорбувати інші фарби і культури тканин, здатні культивуватись in vitro.
UV-спектр — це ртутно-кварцові лампи, заповнені ксеноном. Коли вони нагріваються, при струсі є небезпечними. У них розглядають об'єкти у верхньому освітленні. Нижнє підсвічування через систему конденсорів потребує фільтрації. Конденсори нейтральні. Для фільтрації світлового проміння використовують рідинні конденсори, дистильовану воду, розчин CuSC>4 різної концентрації. Залежно від того, яка частина спектра більше поглинається, штучно підбираються фільтри. На них є градація, де позначається довжина хвилі. Джерелом світла є підсилювач з напругою 2500—3000 вольт, який стоїть збоку. Сила струму невелика, її подають у момент запуску на лампу, протягом 20—30 хв для розігріву. За такої напруги нитка накалу в ксеноні запалюється, а далі лампа працює на звичайному струмі з напругою 220 вольт.
2. ЛСМС-прилад для загострення лез мікротомних ножів має два електричні приводи, які містять ніші, куди вставлені диски з абразивними пастами. Паста — це дрібнодисперсні домішки (відходи від алмазного виробництва). Спочатку фіксується ніж, кут атаки якого змінюється відносно до леза. Кут можна змінювати поворотом ручки, що розташована зверху. Кут повинен бути однаковим. Якщо кути різні, то одна сторона буде гострою, а друга — тупою. Для того, щоб гострити лезо по всій довжині, потрібно часто крутити ручкою, що приведе лезо в рух (див. додаток рис. 4).
3. "НЕСФСТ-32" — це прилад виробництва Німеччини (фірма Цейса). Прилад має мінімальну сферичну та ахроматич-
