Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Таким образом, в отличие от угасания кроветворения в культурах костного мозга из бедренных костей мышей при культивировании того же костного мозга на костной строме в течение более чем 2 недель наблюдается кроветворение, которое обеспечивается взаимодействием кроветворной ткани с костной тканью (рис. 17).
В других экспериментах был проведен сравнительный анализ остеогенеза и кроветворения при эксплантации костного мозга из трубчатых и губчатых костей морской свинки. Как уже указывалось, кроветворение в кусочке костного мозга из трубчатых костей морских свинок прекращается через 4 — 5 дней после эксплантации, а образования костной ткани не наблюдается. В культурах костного мозга из тазовых (губчатых) костей морской свинки на 7 — 10-й день наблюдалось формирование остеогенной ткани на фильтре. Кроветворение в таких условиях наблюдалось в течение 12 дней и более.
6. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ
Продолжительность кроветворения in vitro
Большинство методов, использованных для эксплантации кроветворной ткани, не обеспечивает длительного поддержания кроветворения in vitro. При эксплантации костного мозга взрослых доноров в условиях плазменного сгустка в монослойных и суспензионных культурах происходит лишь кратковременное переживание кроветворных элементов. В дальнейшем на смену кроветворным клеткам приходит популяция соединительнотканных элементов, которая появляется в различные сроки и имеет разный состав в зависимости от использованного метода культивирования.
Эксплантация ткани эмбриональной печени, которая служит органом эмбрионального гемопоэза, позволяет получить несколько иные результаты. Активное кроветворение в культурах печени эмбриона в плазменном сгустке наблюдается в течение 7—10 дней. Есть данные, что при культивировании кусочков печени мышиных эмбрионов и новорожденных мышат во вращающихся пробирках (без применения плазменного сгустка) можно поддержать гемопоэз даже до 3 недель (Sorieul, 1966).
Методы органных культур позволяют получить в целом более длительное поддержание гемопоэза по сравнению с монослойными, суспензионными и плазменными культурами. При этом срок поддержания кроветворения in vitro во многом зависит от методики органного культивирования и от эксплантируемой ткани. Действительно, в эксплантатах печени эмбриона человека на агар кроветворные элементы дегенерируют после 4 дней (Hillis, Bang, 1961). Культивирование кроветворной ткани на плотиках также не дало удовлетворительных результатов (Chen, 1954).
В агаровых культурах, поставленных по методу Wolff и Haffen (1952), создаются несколько лучшие условия для поддержания гемопоэза: в эксплантатах эмбриональной печени, костного мозга и селезенки кроветворение поддерживается в течение 7—10 дней (Poureau-Schneider, 1962, 1963; Salvatorelli, 1966, 1967).
В агаровых культурах суспензии кроветворных клеток, помещаемых на фидер из почечных и эмбриональных клеток, максимальный срок сохранения миелоидных элементов составляет 10 —14 дней (Pluznik, Sachs, 1965; Bradley, Metcalf, 1966).
При культивировании печени мышиных эмбрионов в органных культурах на миллипорных фильтрах по методу, предложенному нами, гемопоэз продолжается 24 — 25 дней. Эритроидное кроветворение прекращается в этих условиях через 5 дней культивирования, а мегакариоцитарное и миелоидное продолжается в течение длительного времени.
По мере культивирования количество кроветворных элементов в культуре падает. В отличие от многих других применяемых методик использование данного метода культивирования обеспечивает не только вызревание коммити-рованных кроветворных предшественников, но и са-моподдержание и дифференцировку линии стволовых кроветворных клеток (см. ниже).
При эксплантации в органные культуры на миллипорных фильтрах фрагментов костного мозга взрослых мышей кроветворение продолжается недолго — в течение 5 — 6 дней. Создается впечатление, что в культурах, начиная с 5-го дня, не происходит прогрессивной дифференцировки миелоидных клеток. Вероятно, они либо трансформируются в соединительнотканные элементы, либо дегенерируют.
Другая картина наблюдается при эксплантации костного мозга на предварительно выращенную костную строму.
Миелоидное кроветворение в этих условиях более 2 недель. Вероятно, в этом случае между кроветворной и остеогенной тканью устанавливаются взаимоотношения индукционного характера, обеспечивающие поддержание кроветворения in vitro.
Длительное (более 2 недель) поддержание кроветворения имеет место в органных культурах костного мозга из ребер взрослых людей (Е. А. Лурия и др., 1972). В этом случае интенсивный рост in vitro остеогенной стромы обеспечивается большим количеством стромальных клеток-предшественников, попадающих в эксплантат при использовании костного мозга из губчатых костей.
В культурах кроветворной ткани на миллипорных фильтрах трудно различить дискретные очаги гемопоэза. Кроветворная ткань in vitro занимает обширные поля, объединяющие большое количество очагов, не имеющих четких границ. Для дальнейшего исследования целесообразно иметь метод получения отдельных очагов кроветворных клеток на миллипорных фильтрах. Миелопоэз и эритропоэз в культурах имеют ряд особенностей.
