Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
клеток гистиоцитарно-макрофагального типа появляются единичные крупные вытянутые или распластанные клетки с большим овальным ядром, содержащим несколько ядрышек. К 6-му дню выявляются отдельные скопления из 4—8 фибробластоподобных клеток. Лейкоциты к этому сроку почти полностью исчезают. Основную массу клеток в культуре составляют по-прежнему мелкие гистиоциты с короткими ветвящимися отростками. В последующие сроки количество фибробластоподобных клеток значительно возрастает, на 9-й день образуются компактные и рыхлые очаги, содержащие по 50—80 элементов. На 12-й день формируются крупные очаги фибробластов, в цитоплазме которых четко выявляются тонофибриллы. В дальнейшем эти очаги сливаются друг с другом. К 20-му дню фибробласты — это преобладающие элементы в культурах (А. Я. Фриденштейн и др., 1970).
Подсчет количества фибробластов показал, что с 3-го по 6-й день количество клеток увеличивается в 4 раза (22), а затем медленно растет до 20-го дня (Р. К. Чайлахян, 1970). Естественно поэтому предположить, что популяция фибробластов увеличивается путем размножения тех фибробластов, которые присутствуют в 3-дневных культурах в небольших количествах, и что между 3-м и 6-м днем эти клетки интенсивно размножаются со временем удвоения порядка 30 часов (А. Я- Фриденштейн и др., 1970). Фиброблас: топодобные клетки в культурах кроветворной ткани обладают высокой пролиферативной активностью. Впервые на это указал А. А. Максимов (1928). Очаги, возникающие при культивировании в монослойных культурах костного мозга и селезенки морских свинок, также содержат многочисленные делящиеся клетки.
Изучение включения Н3-тимидина в фибробласты в культурах костного мозга соответствует этому предположению. В 7-дневных культурах индекс импульсной метки составляет 18% и насыщение наступает за 32 часа, когда Яндекс метки достигает 90%. В 12-дневных культурах. при таком же индексе импульсной метки насыщение происходит между 48 и 72 часами при индексе метки, равном 78% (И. В. Кейлис-Борок и др., 1971). Отсюда следует, что пролиферативный пул в колониях фибробластов в 7-днев-ных культурах чрезвычайно высок, а к 12-му дню культивирования он несколько уменьшается. Возможно, это связано с тем, что часть клеток в таких колониях подвергается дифференцировке и в связи с этим перестает делиться. Сред-
нее время генерации фибробластов в колониях, определенное по кривым насыщения, составляет для 7-дневных культур около 30 часов, а для 12-дневных — около 43 часов.
Клетки, образующие колонии, представляют собой типичные фибробласты, около которых образуются коллагеновые волокна. По морфологии эти клетки идентичны фиб-робластам, возникающим в культурах периферической крови в плазменном сгустке и детально изученным А. А. Максимовым. При гистохимическом исследовании было показано, что эти элементы дают положительную реак-цйю на кислую фосфатазу и отрицательную — на щелочную. Фибробласты характерны для третьей фазы роста монослойных культур костного мозга морских свинок, кроликов, человека, крыс и мышей. Эти клетки снимаются со стекла трипсином и способны многократно пассироваться. При этом они не утрачивают своей типичной морфологии и сохраняют диплоидный набор хромосом (И. Н. Кокорин и др., 1970; А. Ф. Панасюк и др., 1971).
Эксплантация костномозговых клеток при низкой начальной плотности приводит к образованию в культурах дискретных колоний фибробластов. Оказалось, что каждая колония возникает из одной колониеобразующей клетки и что число колоний отражает количество клеток-предшест-венников для фибробластов среди эксплантированных клеток. Оно составляет около 10-5 для костного мозга морской свинки и человека (А. Я. Фриденштейн и др., 1970). Такое естественное клонирование осуществляется благодаря присутствию в популяции большого количества клеток, выполняющих при культивировании роль естественных фидеров для развития фибробластов.
Таблица 1
Результаты хромосомного анализа очагов фибробластов в смешанных культурах клеток костного мозга самцов и самок морских свинок (по Р. К. Чайлахяну и др., 1970)
Номер Количество иденти Самец V" Номер Количество иденти Самец /
очага фицированных в очаге Самка очага фицированных в очаге / Самка
метафазных пластинок метафазных пластинок
1 4 0/4 6 4 4/0
ч 4 0/4 7 4 4/0
3 5 5/0 8 3 0/3
4 3 3/0 9 5 0/5
5 3 0/3 10 4 4/0
Хромосомный анализ очагов в смешанных культурах клеток костного мозга самцов и самок морских свинок показал, что все метафазные пластинки в каждом очаге принадлежат только к кариотипу самца или только к кариотипу самки; смешанных очагов обнаружено не было (табл. 1). Отсюда можно сделать заключение, что каждый очаг фибробластоподобных клеток представляет собой клон, развившийся из одной клетки (Р. К. Чайлахян и др., 1970).
