Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
обращенно-фазовой ВЭЖХ, т. е. потребность в использовании ионообменных
методов до настоящего времени не возникала. Однако ионообменная ВЭЖХ
имеет ряд преимуществ. Это, во-первых, 10- или даже 100-кратное
увеличение емкости колонок при сохранении их размеров,
Глава 4
Рис. 4.23. УФ-спектры аминокислот [147].
и, во-вторых, возможность выполнять разделение при щелочных pH.
Обычно в качестве неподвижных фаз используются два типа материалов: на
основе силикагеля и сшитого полистирола. В щелочной среде устойчив только
последний материал. Большая часть описанных в литературе примеров
применения этого метода относится к разделению маленьких пептидов с
молекулярной массой меньше 2000. Некоторые варианты успешного разделения
приведены в табл. 4.4. В верхней части таблицы
Таблица 4.4. Применение ионообменной хроматографии для разделения
пептидов
Неподвижная фала Элюенг Тем Обнаруживающий ре
Соединение Лите
(форма частиц) пера агент или способ
ратура
тура, обнаружения
°С
Партисил SCX (сфери Ацетат пиридина ---20 Флуорескамин
Ангиотензин, легкие цепи иммуно 148,
ческая)
глобулинов, инсулин, Leu-энквфа- 151,
лин, паратиреоидный гормон, ок- 152
ситоцин, вещество Р, вазопрессин
Ацетат пиридина 55 Флуорескамин
р-Липотропин 149
Цитрат лития 50 Фталевый альдегид
His-содержащие дипептиды 150
Дюпои SCX (сфериче Фосфат натрия ? Электрохимический
Met-энкефалин 153
ская)
Хитачи-гель 3013 С (че Аммиак/ацетоиитрил/ 70 УФ (210 нм)
Белки Бенса Джонса (составление 154
шуйчатая) изопропанол/метан-
пептидной карты)
сульфокислота
DC-4A Ацетат пиридина 52 Нннгидрин
Рибонуклеаза А, белок мозга S 100 155
Цитрат натрия 50---75 Ннигидрин
Коллаген (составление пептидной 156
карты)
DC-1A (чешуйчатая) Ацетат пиридина 43 Нингидрин
'Гиреотропин рилизинг-фактор 157
Хитачи-гель 3013 N (че Аммиак/ацетонитрил/ 20 УФ (210 им)
Калмодулин (составление пептидной 158
шуйчатая) изопропаиол/метаи-
карты)
сульфокислота
Диайон CDR-10 (чешуй Аммиак/метансульфо- 22---70 УФ (210 нм)
Белок мозга 14---3---2, белок мозга 159
чатая) кислота/ацетонитрил/
S100b, калмодулин, белок Бенса
изопропаиол
Джонса (составление пептидных
карт)
Микропак АХ-10 (сфе Ацетат триэтнламмония/ 40 УФ (220 нм)
Дипептиды 160
рическая) ацетонитрил
220 Глава 4
t.MHH
Рис. 4.24. Разделение трипсинового гидролизата белка Бейса Джонса (50
нмоль) методом нонообмеииой хроматографии [154].
Неподвижная фаза: хнтачи-гель 3013 С; элюеит: линейный градиент вода до
0,4 М аммиака, pH 6,2, установлено метансульфокислотой, 50%-ный
ацетонитрил, 25%-иый иза-пропанол; температура: 70 °С.
содержатся данные по катионообменной, а в нижней части - по
апионообменной хроматографии.
Кислые пептиды, как и следовало ожидать, лучше разделяются на
анионообменниках, в то время как нейтральные и щелочные- на
катионообменниках. Хроматограмма трипсинового гидролизата, полученная на
колонке с катионообменной смолой на основе полистирола, приведена на рис.
4.24. Большинство используемых буферов поглощают в ближней УФ-области.
