Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
бензол/ацетонитрил (4:1) с последующим обнаружением УФ-детектором по
поглощению при 300 нм [33]. Некоторые примеры разделения флавоноидных
гликозидов различных групп приведены в табл. 14.1.
14.2.3. Ксантоны
В химии природных соединений ксантоны занимают важное место. По своей
структуре они родственны флавоноидам, и хроматографическое поведение этих
групп соединений также сходно.
Все увеличивающийся интерес к ксантонам обусловлен тем, что они
обладают фармакологической активностью (антидепрессанты, ингибиторы
моноаминоксидазы), а также играют важную роль в хемотаксометрии [34].
Систематическое изучение возможностей разделения ксанто-новых
агликонов методом ВЭЖХ проведено Хостеттманом и Мак-Нейром [35].
Слабополярные ксантоны можно легко разделить на неподвижных фазах с
химически привитыми CN-rpyn-пами, элюентом может служить смесь н-
гексан/хлороформ (13:7) или циклогексан/хлороформ (1:4). Разделение
агликонов с двумя и более свободными гидроксильными группами необходимо
проводить на менее полярных фазах, например с привитыми ЫНг-группами,
элюируя их смесями диоксан/дихлорме-тан (1:9) или изооктан/хлороформ
(3:17). Хлороформные экстракты различных видов Getitiana были
проанализированы при помощи ВЭЖХ, идентификация ксантоновых агликонов
была осуществлена с использованием УФ-детектора и масс-спектрометра [36].
Плохо поддающиеся разделению изомерные ксантоновые агликоны гентизин
(1,7-дигидрокси-З-метоксиксан-тон) и изогентизин (1,3-дигидрокси-7-
метоксиксантон) удалось разделить на химически привитых фазах Cis
элюированием смесью метанол/вода (1:1) [37]. Эти же соединения были
разделены на лихросорбе RP-8 при элюировании смесью ацетонитрил/вода [38,
39]. Авторы работы [40] в процессе выделения
Вторичные растительные метаболиты
651
нового ксантонового агликона из Gentiana corymbifera прибегли к системе
силикагель-хлороформ с небольшим количеством метанола (подвижная фаза).
В работе [37] сделан вывод, что идеальной системой для разделения
природных ксантоновых гликозидов является силикагель с химически
привитыми группами Cis и смесь метанол/вода различного состава.
Разделение изомерных дисахаридов было проведено с хорошим разрешением (до
нулевой линии) на ц-бондапаке Cie при элюировании смесью метанол/вода
(45:55). Перметилированные ксантоновые гликозиды можно легко очистить
хроматографически на микропаке CN элюированием смесью изооктан/хлороформ
(3:7) [36].
14.2.4. Антрахиноны, хиноны и родственные соединения
Несколько примеров разделения хинонов и антрахинонов описаны и обсуждены
в обзоре [4]. Поскольку эти полифенолы входят в состав многочисленных
лекарственных средств, необходимы быстрые и надежные методы их
количественного определения. Один из таких методов, а именно метод
разделения и обнаружения арбутина, метиларбутина, гидрохинона и его
мономе-тилового эфира разработан авторами работы [41]. Разделение
проводится методом обращенно-фазовой хроматографии на ц-бондапаке Cie при
элюировании смесью метанол/вода (10:90). Разделение всех перечисленных
соединений длилось 22 мин, обнаружение осуществлялось при помощи УФ-
детектора (280 нм). Арбутин можно легко обнаружить при его содержании
менее 25 нг.
Фармакологически чрезвычайно важен препарат алоин, представляющий
собой смесь двух стереоизомеров С-гликозидпроиз-водных антрахинона. В
результате хроматографического исследования методом ВЭЖХ сока Aloe ferox
и Aloe arborescens эти два стереоизомера были разделены с хорошим (до
нулевой линии) разрешением [42]. Разделение проводили на полупрепара-
тивной колонке с лихросорбом RP-18 при элюировании смесью метанол/вода
(45:55), которое завершилось менее чем за 12 мин. Обнаружение
осуществлялось по поглощению при 360 нм (УФ-детектор) [42].
Один из методов качественного и количественного анализов препаратов
Senna описан в работе [123]. Изомерные диантрон-в.в'-диглюкозиды сеннозид
А и сеннозид В были успешно разделены методом ион-парной хроматографии.
Наилучшее разрешение было достигнуто на неподвижной фазе. RP-8 при
элюировании смесью метанол/ацетонитрил/вода/ИПХ-А-реагент(тетра-
бутиламмонийфосфат) (15:15:70:1,65). Хроматограмма приведена на рис.
14.2.
652
Глава 14
Glc-О О ОН
СООН Сеннозид A: SS или RR-конфигурация
СООН Сеннозид В : SR или SR-конфигурация
G1C-О О ОН
Сеннозид И
У\
о
5
10
15
•?0 ми.
Рис. 14.2. Разделение методом ВЭЖХ препарата Senna f 123].
Разделение сеннозидов методом ИПХ происходит быстрее^, чем при
градиентном элюировании [43, 44]. Антрахиноновый агликон реин также
входит в состав препаратов на основе Senna (экстракты Cassia angustifolia
или Cassia senna). Его также можно выделить методом ИПХ на неподвижной
фазе RP-впри элюировании смесью вода/метанол/ИПХ-А (42:58: 1,65) в
течение 6 мин [123].
14.2.5. Другие растительные фенольные соединения
Как уже давно известно, лигнанподофиллотоксин и родственные-ему
