Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
РЕЗЮМЕ
Обнаружить вирусные антигены с помощью методики флуоресцирующих антител можно только при налкчии хорошей специфической антисыворотки с высоким титром и хорошего конъюгата. Клетки культур тканей также должны быть в хорошем состоянии, поскольку мертвые клетки неопецифично захватывают флуоресципую-щие конъюгаты. В будущем эта техника, по мнению автора, должна заменить реакцию нейтрализации и, следовательно, ускорить диагноз вирусной инфекции в тканевых культурах. С помощью этой методики можно определять местоположение антигена, в связи с чем ее можно будет применять для быстрой диагностик:: вирусных заболеваний, используя срезы, полученные непосредственно из тканей больного.
ФИРМЫ, ПОСТАВЛЯЮЩИЕ ПРИБОРЫ И РЕАКТИВЫ
Chance Bros. Ltd., Smethwick 40, Birmingham Wellcome Reagents Ltd., Beckenham Kent Standon Scientific Co. Ltd., 65 Pound Lane Willesden, London, N.W.10 Polaron Equipment Ltd., Dei-viljem House, Shakespeare Road. Finchley, London, N.3. Oxoid Division, Oxo Ltd., London, S.E.l.
Нефлуоресцируюшие предметные и покровные стекля Порошок из печени
Микроскопы
Polarfluor В (для заключения';
Солевой фосфатный буфер в таблетках
ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Coons А. И., Creech И. }., Jones R. N., Berliner Е.. J. Immun., 45, 159 (1942).
2. Liu С., Proc. Soc. rep. Biol., N. Y„ 92, 883 (1956).
3. Hers J. F., Am. Rev. resp. Dis.. 88 (Supp 1.) 33:? (1963).
4. Llanes-Rodas R., Liu C., New Engl. J. Med., 275, 516 (1966).
5. Gardner P. S., McQuillan J., Br. med. J., 3, 340 (1968).
6. Haire М., Lancet, i, 920 (1969).
7. McQuillan J., Gardner P. S., Br. med. J., 1, 602 (1968).
8. Welter Т. Н„ Coons А. Н., Ргос. Soc. exp. Biol. Med., 86, 789 (1954).
9. Goldwasser R. A., Shephard С, С., J. Immun,, 80, 122 (1958).
10. Nairn R. СFluorescent Protein Tracing, 2nd edn, p, 119, Livingstone, Edinburgh, 1962.
11. Nairn R. C„ Fluorescent Protein Tracing, 2nd edn., p. 125, Livingstone, Edinburgh, 1962.
12. Sommerville R. G., J. clin Path., 20, 212 (1967).
13. Sander G„ J. clin. Path., 22, 737 (1969).
Глава 9
КУЛЬТУРА ЗАРОДЫШЕВЫХ КЛЕТОК ИЗ АМНИОТИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ
Р. полдинг
Department of Pathology, Southmead Hospital, Bristol
ВВЕДЕНИЕ
В последние годы благодаря развитию методов культивирования клеток зародыша, обнаруженных в амниотической жидкости, полученной при трансабдоминаль-ном амниоцентезе, многие биохимические и цитогенетические дефекты зародыша стало возможным диагностировать на ранних стадиях беременности. Небольшая часть клеток, которые отслаиваются в жидкость, окружающую плод, способна делиться, и через
2—4 нед в зависимости от исходной концентрации жизнеспособных клеток из них можно получить однослойную культуру преимущественно эпителиоподобных клеток. Для цитогенетических исследований хромосомного набора зародыша используют первичные культуры или первые субкультуры. Клетки, накопленные от нескольких пересевов, исследуют биохимически для определения возможных нарушений метаболизма, в частности таких, которые связаны с ферментной недостаточностью.
Весьма важно, что сейчас по результатам цитогенетического или биохимического анализа можно решать вопрос о прерывании беременности, если к этому имеются показания. Хотя аборт с помощью гипертонического солевого раствора можно вызвать и на 24-й нед развития, все же беременность следует прерывать не позднее 20 нед [1]. Поскольку для анализа культивируемых клеток необходимо 4 нед {может потребоваться повторная процедура), проба амниотической жидкости должна быть взята не позднее 16 нед беременности. Было показано [2], что число жизнеспособных клеток на единицу объема амниотической жидкости увеличи-
вается с 11 по 34 нед. Амниоцентез лучше проводить между 15-й и 18-й нед, поскольку в этот период шансы на успешное культивирование клеток наиболее велики и еще есть время для искусственного прерывания беременности.
Таким образом, основная проблема, связанная с культивированием зародышевых клеток нз амниотической жидкости для внутриутробной диагностики,— это получение в течение 4 нед клеток в количествах, достаточных для хромосомного анализа и биохимического исследования.
ЦИТОЛОГИЯ АМНИОТИЧЕСКОЙ жидкости НА 16-Й НЕДЕЛЕ БЕРЕМЕННОСТИ
На 16-й неделе беременности теменно-кобчиковая длина зародыша человека составляет приблизительно 160 мм, а его вес — около 100 г. Он окружен 100— 250 мл амниотической жидкости. Плодный пузырь создает зародышу водную среду, обеспечивающую стабильные условия роста, а также защищает его от механических повреждений.
Амниотическая жидкость образуется за счет поступления внеклеточной жидкости зародыша через первичную кожу, а после 12 нед — также за счет мочи зародыша. На этой стадии жизненного цикла амниотическая среда, вероятно, находится под контролем тех же гомеостатических механизмов, что и сам зародыш [3].
Со 'стороны, обращенной к зародышу, амнион выстлан внезародышевой эктодермой, которая переходит а эпителий кожи и слизистых полости рта и носа, а также конечных отделов пищеварительного тракта и моче-<по-лового пути зародыша, У эмбрионов на ранних стадиях амниоэктодермальное соединение находится на вентральной стенке; по мере развития зародыша оно сохраняется в виде наружных частей пупочного канатика. До 32-й нед беременности эктодерма амниона состоит из низких кубических клеток, которые затем сменяются высокими цилиндрическими [4]. Непрозрачный участок прозрачного в норме амниона, как было обнаружено, состоит из слоя эпителиальных клеток, напоминающие участок плоскоклеточной метаплазии [5],
