Физическая биохимия - Фрайфелдер Д.
Скачать (прямая ссылка):
Для 14С период полураспада составляет примерно 5000 лет, т. е. в 400 раз больше, чем для 3Н. Таким образом, в случае одного 14С на остаток тимидина удельная радиоактивность составит 25 : 400=0,62 Ки/ммоль. Следовательно, при 1 мКи/ммоль одному остатку тимидина будет соответствовать 1 : 0,62 = = 1,6 атома 14С, По сравнению с 12С это увеличит молекулярную массу на 3,2 единицы атомной массы. Вычисления, аналогичные тем, что проводились в -случае с 3Н, приведут к результату, что плотность ДНК с 50% пар А*Т составит 1,702 г/мл. Для изотопа 32Р подобный расчет приведет к 1 атому 32Р на 8 нуклеотидов, что увеличит плотность на 0,0006 г/мл.
11-15. В этом случае может иметь место изменение формы; достаточное связывание иодид-иона может оказать влияние на молекулярную массу или может произойти димеризация, сопровождающаяся изменением формы. Изменение молекулярной массы можно заметить при равновесной седиментации.
11-16. ДНК можно детектировать при помощи абсорбционной оптики. Коэффициент экстинкции ДНК в максимуме поглощения (т. е. 260 нм) намного превышает соответствующую величину для белка при 280 нм. В случае белков с группами, имеющими большую абсорбцию (например, гемоглобин или цитохром с), это правило может не соблюдаться.
11-17. Более вероятно, что тот материал, который находился в осадке на дне пробирки, не был суспендирован при перемешивании. Величина s, полученная при втором центрифугировании, слишком велика, потому что концентрация ниже, чем первоначальная концентрация в клетке.
11-18. Комбинация акридинового оранжевого и видимого света изменяет ДНК таким образом, что связи в сахар-фосфатном скелете расщепляются при щелочных значениях pH.
11-19. Проведите седиментацию при разном времени и покажите, что расстояние изменяется пропорционально времени седиментации. Градиент плотности, который изокинетичен для ДНК, не будет изокинетичным для белка, так как ДНК и белок имеют разные плотности.
11-20. Нет, поскольку отсутствуют свободные концы для того, чтобы существовало торможение за счет вязкости.
11-21. Величина S2o,b линейной ДНК уменьшится, потому что молекула удлинится и станет более жесткой. Этот эффект больше, чем тот, который имеет место вследствие большей массы комплекса.
11-22. Для нативных белков эффект, если его можно наблюдать, будет маленьким, потому что компактность белка обычно не является следствием присутствия дисульфидных связей.
В денатурированных белках его можно наблюдать, потому что дисульфид-ные связи не позволяют молекуле превратиться в неупорядоченный клубок.
11-23. Mg+ должен быть связан с ДНК в растворе CsCl, магниевая соль ДНК менее плотная, чем цезиевая.
12-1. Эффект в случае белков будет небольшим, поскольку причина эффекта в случае аминокислот заключается в том, что ионы U+ и К+ могут связаться с карбоксильными группами и изменить плотность молекул. В белках присутствует только немного свободных карбоксильных групп.
12-2. Да, потому что относительная масса повышается из-за связывания Na+ и Mg2+ с фосфатами.
12-3. В пикнометре содержится 9,9249 г НгО, следовательно, его объем составляет 9,9249:0,9982=9,9428 см3. Масса раствора в пикнометре равна 11,3251 г, а плотность 11,3251:9,9428=1,1390 г/см*. Раствор, состоящий из 3,5921 г растворенного вещества и 9,9413 г. НгО, имеет общую массу 13,5334 г, а объем 13,5334:1,1390— 11,8818 см3. Объем воды, который потребовался для приготовления раствора, составил 9,9413:0,9982=9,9592 см3. Следовательно, если масса увеличивается на 3,5921 г, объем изменяется на 11,8818— —9,9592= 1,9226. Следовательно v — 1.9226:3,5921 =0,535.
12-4. Искривление обычно означает, что образец не гомогенен, а содержит много компонентов. Однако термическая конвекция может вызывать искривление. Если кривая состоит из двух ветвей, то образец состоит из двух типов молекул.
12-6. Следует предпочесть более низкую скорость, потому что это приведет к тому, что диффузионное расширение произойдет за более короткое время. Проведение измерений со смесью двух компонентов целесообразно только тогда, когда две границы полностью разделены.
12-7. Уменьшение связано с возрастанием трения. Гибкий прут имеет большее Д так как он встречает меньшее сопротивление. D увеличивается по мере того, как уменьшается плотность, потому что более плотные молекулы более легко двигаются при столкновениях с молекулами растворителя.
13-1. При более высокой концентрации NaCl образуются внутрицепочечные водородные связи, и одноцепочечная ДНК становится более компактной; следовательно, [Г|] ниже. В формальдегиде аминогруппы оснований титруются и внутрицепочечные водородные связи не могут образоваться. В 0,01 М растворе NaCl такого эффекта не будет, потому что в отсутствие формальдегида нет водородных связей. В 1 М растворе NaCl одноцепочечная ДНК будет менее компактной в присутствии формальдегида, поэтому [ц] будет больше 3. Однако [т|] будет меньше 30, потому что в 1 М NaCl отрицательно заряженные
ГЛАВА
12'^* s20, BRT _ 14,2 ¦ 10~13 (8,3100 • Ю7) 293
