Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка):
Гены опухолеродных вирусов и онкогены, кодирующие трансформирующую функцию, не влияют (или влияют очень слабо) на первичные клетки. Однако они могут трансформировать стабильные линии клеток, которые уже были иммортализованы либо путем введения вирусных или клеточных генов, кодирующих функцию иммортализации, либо в результате спонтанной мутации, либо под действием химических канцерогенов. В качестве примера можно привести средний Т-антиген Ру, который не способен трансформировать первичные клетки, но трансформирует стабильные клеточные линии или клетки, которые были ранее иммортализованы большим Т-антигеном Ру. Интересно, что функция аденовирусного Е1А может замещать функцию большого Т-антигена Ру; котрансфекция первичных клеток плазмидами, одна из которых кодирует Е1А аденовируса, а другая— средний Т-антиген Ру, приводит к эффективной трансформации [246]. Таким образом, ген иммортализации одного ДНК-содер-жащего опухолеродного вируса может быть дополнен геном трансформации другого ДНК-содержащего опухолеродного вируса.
Функция иммортализации, кодируемая генами опухолеродных ДНК-вирусов и онкогена туе ретровируса, может дополнять трансформирующую функцию вирусных и клеточных онкогенов [162, 246]. Человеческий онкоген ras, выделенный из карциномы мочевого пузыря, трансформирует стабильную линию
ЗТЗ мышиных клеток, но не первичные или вторичные культуры клеток грызунов. Путем котрансфекции онкогеном ras и геном большого Т-антигена Ру [162] либо геном Т-антигена аденовирусного Е1А [246] может быть достигнута полная трансформация клеток грызунов в культуре. Более того, с помощью котрансфекции онкогенами ras и туе удается трансформировать также вторичные культуры клеток грызунов [162], а фиброблас-ты хомячка, иммортализованные в культуре обработкой канцерогеном, трансформируются одним геном ras [204]. Все проведенные ранее работы показывают, что трансформирующие гены /опухолеродных вирусов выполняют по крайней мере два класса биологических функций. Но, как мы уже отмечали, в свойствах клеток, которые экспрессируют вирусные трансформирующие гены, кодирующие биологическую функцию одного и того же класса, есть тонкие, но явные различия. Эти и другие данные указывают на то, что должна существовать третья участвующая в трансформации биологическая функция и что эту функцию могут выполнять какие-то спонтанные клеточные изменения или еще один, третий вирус-специфический ген.
Самые последние данные наводят на мысль, что опухолеродные ДНК-вирусы, ретровирусы и химические канцерогены активируют одни и те же клеточные гены. Таким образом, по-види-мому, пути онкогенеза ограничены, и, возможно, основой злокачественности является аберрантная регуляция небольшой группы генов. Данные о том, что продукт какого-то гена SV40 активирует экспрессию специфических клеточных генов, были получены еще в ранних работах: заражение SV40 стимулировало синтез клеточной ДНК, рибосомной РНК и клеточной тимидин-киназы. Эти старые сведения согласуются с результатами экспериментов по гибридизации, показывающими, что примерно 3% последовательностей клеточной мРНК, присутствующих в трансформированных SV40 клетках, в нетрансформированных клетках отсутствуют. Самые последние работы, в которых проведен анализ библиотеки клонов кДНК, соответствующих мРНК клеток, трансформированных SV40, наводит на мысль, что экспрессия некоторых клеточных мРНК в трансформированных SV40 клетках усилена.
Библиотека кДНК-клонов была получена с помощью обратной транскрипции популяции мРНК мышиных клеток, трансформированных SV40, и последующего клонирования в плазмид-ных векторах [257, 258]. Затем был проведен скрининг на выявление тех видов мРНК, которые в трансформированных клетках представлены в более высокой концентрации, чем в нетрансформированных. При этом использовались два подхода. В одной работе проводили гибридизацию 430 клонов кДНК с мРНК трансформированных и нетрансформированных клеток, меченной
in vitro y^-P-ATP с помощью полинуклеотидкиназы [257]. Уровень экспрессии клеточных мРНК, гомологичных трем из 430 клонов кДНК, в индуцированных SV40 опухолях и трансформированных клетках в 100 раз превышал нормальный. Транскрипты, соответствующие этим трем клонам кДНК, синтезировались на столь же высоком уровне в 8У40-/5А-трансформированных клетках при пермиссивных температурах; отсюда следует, что экспрессию мРНК, по-видимому, регулировал большой Т-антиген SV40.
В другой работе с использованием мРНК из клеток, трансформированных SV40, была создана библиотека кДНК из 6400 клонов. Скрининг проводили путем гибридизации с кДНК-зондом; эта ДНК была обогащена последовательностями, специфичными для мРНК клеток, трансформированных SV40. Из 6400 клонов кДНК были идентифицированы и охарактеризованы 42 позитивных клона; по картине распределения рестрикционных фрагментов и по общим нуклеотидным последовательностям их можно разбить на четыре группы. Анализ клеточных линий, трансформированных SV40, позволил сделать следующий вывод: общая особенность процесса трансформации SV40 со-
