Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
2,1.1» Важность корреляции in vivo
В большинстве опубликованных работ суждения об изменениях клеток, сопутствующих онкогенной их трансформации, были высказаны не на основании предпринятых попыток детального тестирования клеточных линий, используемых для исследования онкогенности in vivo. Клетки классифицировались как нормальные или злокачественные на основании сообщений других лабораторий. При этом предполагалась возможность изменения природы .тканей, из которых клеточные линии были получены, и других фенотипических изменений.
13
Не доказано, что указанные изменения отражают онкогенную трансформацию и то, что клетки подвергаются воздействию агентов, способных ее индуцировать.
Такая классификация, как неоднократно подтверждалось, неправильна, а заключения, исходящие из нее, обычно отвергались результатами последующих исследований клеточных линий с установленным статусом. Ошибки классификации — следствие, по крайней мере, следующих причин: клеточные фенотипы, включая онко-генность, нестабильны в культуре; небольшие различия в методах культивирования быстро приводят к образованию новых видов, поэтому клетки той же номинальной линии, но культивируемые в разных лабораториях, в действительности часто являются различными клетками; опухоли представлены разнообразньши типами клеток, некоторые из которых являются нормальными, другие —- неопластическими; эффективность трансформации многими онкогенными факторами довольно низка, поэтому обработка клеток онкогенным агентом еще не дает уверенности в том, что трансформация произойдет.
2.1.2. Нестабильность фенотипа и видообразование
Опухолевые клетки in vivo, нормальные и трансформированные клетки в культуре обладают выраженной фенотипической нестабильностью, что является результатом комбинации генотипических изме* нений, селекции множественных субпопуляций и физиологической адаптации. Двумя наиболее существенными параметрами изменений, которые могут наблюдаться в культуре, являются спонтанная трансформация нормальных клеток и утрата или снижение онкогенности истинно опухолевыми клетками. Оба события взаимосвязаны. Спонтанная трансформация клеток отмечалась для широкого cneKipa клеточных линий и при настоящих методах культивирования представляется практически универсальным явлением (Gey, 1941; Earle et al., 1943; Sanford et al., 1950; Fogh, Hok, 1958; McAllister, Coriell, 1959; Sanford et al., 1961b, 1970; Evans, Di Paolo, 1975; Montesano et al., 1977; Colburn et al., 1978). Начало спонтанной трансформации непредсказуемо и, вероятно, зависит от тонких деталей методологии культивирования (Sanford et al., 1970). Спонтанная трансформация определялась уже на 8-м пассаже в течение 8—12 недель после начала пассирования культур (Sanford et al., 1950, 1961b, 1970). С практической точки зрения это означает, что клетки, выделенные из нормальных тканей, могут оставаться нормальными в течение 4—6 пассажей в культуре. Предположение о том, что нормальный статус клеток сохраняется вне этих сроков, сразу же становится подозрительным.
Частичная, а иногда полная утрата онкогенности при культивировании также отмечается для разнообразных опухолевых линий (Jacoby, 1943; Earle, 1957; Dawe et aL, 1958; De Brnyn, Hansen-Melander, 1962; Foley, Drolet, 1964; Moore et al., 1968; Morgan, Eng, 1972; Jurin, 1973; Sorenson et al., 1978; Jamabasi, Nettesheim, 1979). В некоторых случаях уменьшение онкогенности является прямым
14
результатом усиления антигенности клеток, которое увеличивает степень иммунного отторжения организмом хозяина и, таким образом, уменьшает частоту выхода трансплантатов (Hewitt, 1978; Jama-basi, Nettesheim, 1979). До сих пор не ясно, действительно ли наблюдалась утрата онкогенного статуса в этих случаях. Практическим следствием таки^ результатов является то, что клеточная линия, поддерживаемая в культуре в течение длительного времени и не вызывающая опухоли in vivo, не может рассматриваться как нормальная до тех пор, пока однажды не будет установлена утрата ее имму-ногенности.
Существуют значительные основания для предположения того, что слабые различия условий культивирования, таких, как тип и концентрация сыворотки, частота субкультивирования, плотность пересева и сбора клеток, создают соответствующее селективное давление, быстро приводящее к видообразованию клеток, отличающихся от исходных (Sanford, 1970; Freedman, Shin, 1974; Tucker, 1977; Varani etal., 1979). Таким образом, существует вероятность, что в двух различных лабораториях клетки, даже если они выделены от общего предка и номинально представляют одинаковую линию, могут в действительности быть полностью различающимися клеточными линиями. В данном случае видообразование происходит либо в результате селективного давления, связанного со слабыми различиями техники культивирования, либо с различного характера генетическими, ка-риотипическими изменениями и вегетативной рекомбинацией.
Данные литературы и результаты исследований, проведенных в других лабораториях, свидетельствующие о нормальном или опухолевом состоянии определенной клеточной линии, не могут быть признаны действительными для клеток той же номинальной линии, выращиваемых отдельно. Статус клеточной линии в одной и той же лаборатории не может рассматриваться постоянным в течение достаточно длительного периода времени. Попытки установить корреляцию признаков трансформации in vitro и онкогенности in vivo требуют экспериментальной проверки в одно и то же время с одними и теми же клеточными культурами.
