Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
концентрации 5 мг/мл в дистиллированной воде и добавляют в среду в
концентрации 100 мкл/л. При необходимости агар добавляют в концентрации 8
г/л.
Стократный исход Компоненты Навеска/100 Мл Концентрация
ный раствор исходного раствора (мг/л)
(100Х)
100хСА раствор 1 nh4no3 4,00 г 400,000
СаС12-2Н20 2,93 г 293,000
ЮОХСА раствор 2 MgS04-7H20 2,46 г 246,ООо
100ХСА раствор 3 FeS04-7H20 0,27 г 27,000
Na23flTA 0,37 г 37,000
ЮОхСА раствор 4 КН2РО4 0,68 г 68,000
ЮОХСА раствор 5 Н3ВО3 62,00 мг 6,200
MnS04-4H20 1,70 мг 0,170
ZnS04-7H20 2,80 мг 0,280
CoCl2-6H20 0,25 мг 0,025
CuS04-5H20 0,25 мг 0,025
Na2Mo04-2H20 0,24 мг 0,024
Компоненты, до6a вляемые непосред-
ственно в конечны й раствор
Инозитол 180,000
Пиридокснн 0,500
НУК 0,100
6-БАП 1,000
Сахароза 20 000,000
pH 5,6
В. Среда В5 [31]
Компоненты Концентрация (мг/л)
Макродобавки
KN03 3000,000
(NH4)2S04 134,000
MgS04-7H20 500,000
СаС12-2Н20 150,000
NaH2P04H20 150,000
Секвестрен 330 Fe 28,000
MnS04-H20 10,000
Микродобавки
Ki 0,750
Н3ВО3 3,000
ZnS04-7H20 2,000
CuS04 0,025
Na2Mo04-2H20 0,250
Трансформация клеток двудольных растений
175
Продолжение таблицы
Компоненты Концентрация (мг/л)
СоС12-6Н20 0,025
Миоинозитол 100,000
Тиамин-НС1 10,000
Никотиновая кислота 1,000
Пиридоксин-НС1 1,000
Сахароза ?0 000,000
pH 5,5
Перечисленные выше компоненты, за исключением сахарозы, поставляются
готовыми к употреблению фирмой Flow Laboratories Ltd.
Г. Раствор Хогланда
Исходный раствор Компоненты Концентрация (г/л) Объем исходного
раствора на лнтр
конечной среды
(мл)
А Макродобавки 101,100 6,0
KN03
В Ca(N03)2-4H20 236,160 4,0
С NH4H2P04 115,080 2,0
D MgS04-7H20 246,490 1,0
Микродобавки 3,728 1,0
КС1
Н3ВО3 1,546 1,0
MnS04-H20 0,338 1,0
Б ZnS04-7H20 0,575 1,0
CuS04-5H20 0,125 1,0
H2Mo04 0,081 1,0
F Fe ЭДТА 6,922 1,0
Исходные растворы А - F готовят отдельно и хранят в течение
нескольких недель при 4°С или более длительное время в замороженном виде
при -20 °С.
Приложение 2 [III]
Антибиотики, добавляемые в среды для культур растительных клеток
- Карбенициллин (Cb) (Sigma): растворяют в концентрации
100 мг/мл в дистиллированной Н2О и стерилизуют фильтрованием. Хранят
до 1 мес при 4°С или в замороженном виде (-20 °С).
176
Глава 2
- Цефотаксим (Сх) (Rousell Laboratories Ltd.): растворяют
в дистиллированной Н20 в концентрации 50 мг/мл и стерилизуют
фильтрованием. Хранят при -20 °С. Содержащийся в культуральной среде
цефотаксим разрушается на свету приблизительно через 3 дня.
- Канамицин (Km) (Sigma): растворяют в концентрации
10 мг/мл в дистиллированной НгО и стерилизуют фильтрованием. Хранят
до 1 мес при 4°С или в замороженном виде (-20 °С).
- Рифампицин (Pf) (Sigma): растворяют в метаноле в концентрации 20
