Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
Приложение 3 [I]
Выделение протопластов из клеток суспензионной альбинотической культуры
Petunia hybrida (сорт Blue Lace)
1. Отбирают суспензионные культуры Petunia hybrida сорта Blue Lace на 4-
й день после начала субкультивирования и осаждают клетки в течение 10-15
мин.
2. Удаляют всю среду стерильной пастеровской пипеткой.
3. Добавляют 40 мл раствора фермента (0,05% мацерозима и 0,2% целлюлозы
в CPW 13М, приложение 2 [V]; раствор стерилизуют фильтрованием и хранят
при -20°С). Инкубируют в течение ночи на медленной качалке (80 об/мин,
круговое вращение).
4. Фильтруют раствор через сетку (диаметр ячеек 64 мкм), собирая
фильтрат в стерильную чашку Петри.
5. Переносят фильтрат в стерильную центрифужную пробирку на 15 мл и
центрифугируют 5 мин при 400 об/мин.
6. Удаляют супернатант и ресуспендируют осадок в 10 мл CPW 13М
(приложение 2[V]).
7. Центрифугируют 5-10 мин при 400 об/мин.
8. Дважды отмывают в MSPI 9М (приложение 2[Щ) путем осаждения (400
об/мин, 5 мин).
9. Ресуспендируют осадок в 10 мл MSPI 9М и измеряют количество
протопластов с помощью гемоцитометра.
Литература
1. Ansorge W. (1984) Improved system for capillary microinjection into
living cells. Exp. Cell Res. 140, 31-7.
2. Balazs E., Bouzotibaa S., Guilley H., Jonard G., Paszkowskl I.,
Richards K-
(1985) Chimaeric vector constructions for higher-plant transformation.
Gene
40, 343-8.
Трансформация растительных клеток путем трансфекции ДНК
233
3. Bevan М. W., Flavell R. В., Chilton M.-D. (1983) A chimaeric
antibiotic resistance gene as a selectable marker for plant cell
transformation. Nature 304, 184-7.
4. Celis J. E. (1984) Microinjection of somatic cells with
micropipettes: Comparison with other transfer techniques. Biochem. J.
223, 281-91.
5. Crossway A., Hauptli H., Houck С. М., Irvine J. М., Oakes J. V.,
Perani L. A.
(1986) Micromanipulation techniques in plant biotechnology.
Biotechniques
4, 320-34.
6. Crossway A., Oakes J. V., Irvine J. М., Ward B., Knauf V. C.,
Shewma-ker С. К¦ (1985) Integration of foreign DNA following
microinjection of tobacco mesophyll protoplasts. Mol. Gen. Genet. 202,
179-85.
7. De la Pena A., Lorz H., Schell J. (1987) Transgenic rye plants
obtained by injecting DNA into young floral tillers. Nature 325, 274-6.
8. Deshays A., Herrera-Estrella L., Caboche M. (1985) Liposome-
mediated transformation of tobacco mesophyll protoplasts by ап E. coli
plasmid. EMBO J. 4, 2731-7.
9. Draper J., Davey M. R., Freeman I. P. (1986) Delivery systems for
the transformation of plant protoplasts. In: Plant Cell Culture
Technology, pp. 271-301. Ed. Yeoman, М. M. Blackwell Scientific
Publications, Oxford.
10. Draper J., Davey M. R., Freeman J. P., Cocking E. С., Сох В. 1.
(1982) Ti plasmid homologous sequences present in tissue from
Agrobacterium plasmid-transformed Petunia protoplasts. Plant and Cell
Physiol. 23, 451-8.
11. Freeman J. P., Draper J., Davey M. R., Cocking E. C., Gartland К¦
M. A., Harding K., Pental D. (1984) A comparison methods for plasmid
delivery into plant protoplasts. Plant Cell Physiol. 25, 1353-65.
12. Fromm М. E., Taylor L. P., Walbot V. (1985) Expression of genes
transferred into monocot and dicot plant cells by electroporation. Proc.
Natl. Acad, Sci. USA 82, 5824-8.
13. Fromm М. E., Taylor L. P., Walbot V. (1986) Stable transformation
of maize after gene transfer by electroporation. Nature 319, 791-3.
14. Griesbach R. J. (1983) Protoplast microinjection. Plant Molecular
Biology Reporter 1, 32-7.
15. Hain R., Stabel P., Czernllofsky A. P., SteinbCss H. H.,
Herrera-Estrella L.,
Schell J. (1985) Uptake, integration, expression and genetic
transmission of
a selectable chimaeric gene by plant protoplasts. Mol. Gen. Genet.
199, 161-8.
16. Hain R., Steinbiss H.-H., Schell J. (1984) Fusion of Agrobacterium
and E. coli spheroplasts with Nicotiana tabacum protoplasts - Direct gene
transfer from microorganism to higher plant. Plant Cell Rpts. 3, 60-4.
17. Hammer R. E., Pursel V. G., Rexnroad С. E., Wall R. J., Bolt D.
J., Ebert К. M" Palmiter R. D., Brinster R. L. (1985) Production of
transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection. Nature 315, 680-3.
18. Herrera-Estrella L., De Block М., Messens E., Hernalsteens
J.-P., Van Montagu М.,
Schell J. (1983) Chimaeric genes as dominant selectable markers
in plant cells. EMBO J. 2, 987-95.
19. Klein Т. М., Wolf E. D., Wu R., Sanford J. C. (1987) High-velocity
microprojectiles for delivering nucleic acids into living cells. Nature
327, 70-3.
20. Koncz C., Olsson O., Landridge W. H. R" Schell J., Szalay A. A.
(1987) Expression and assembly of functional bacterial Iuciferase in
plants. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 131-5.
21. Krens F. A-, Molendijk L., Wullems G. J., Schilperoort R. A.
