Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 19.2. Количество изотипов, секретируемых клонами из подгрупп В-клеток (по [12])
% индивидуальных клонов, секретирующих следующие количества различных изОтипов
Подгруппа й-клеток 1 2 3 4 5 6 7
Первичные В-клетки 35 29 31 6 0 0 0
Нефракционированные
s-n+ 18 29 24 18 12 0 0
S-JA- 54 39 0 8 0 0 0
В-клетки памяти 20 24 20 15 И 9 2
Нефракционированные
s-n+ 44 28 13 13 3 0 0
з-ц-у 50 50 0 0 0 0 0
S-jX-V+ 48 26 13 9 0 4,3 0
процесс, управляемый антигеном, а не запрограммированный в онтогенезе. Кроме того, эти данные свидетельствуют в пользу однолинейной модели экспрессии изотипов, поскольку единственная В-клетка может давать несколько изотипов, в том числе IgG и IgA, при последовательной пролиферации и диффе-ренцировке. Об этом свидетельствует наличие относительно редко встречающейся легкой A-цепи у каждого из тех нескольких клонов, которые были способны секретировать четыре или более изотипов. Это практически исключает всякое сомнение в том, что они являются истинными клонами. Аналогичные опыты независимо провели Джиэрхарт и Цебра [19], которые использовали один и тот же тест с клонированием В-клеток, но разные системы антигенов — фосфорилхолин (ФХ) и динитрофенил (ДНФ) — и разные источники В-клеток (пейеровы бляшки и селезенку). Они установили, что более половины клонов, полученных от положительных В-клеток s-fi+, секретировали IgG и большинство из них секретировало также IgM и IgA.
Связь между фенотипом рецептора и принадлежностью В-клеток памяти к определенному классу также до конца не выяснена. В ряде работ, проведенных в основном с использованием системы адоптивного переноса, было показано, что клеточную память почти целиком можно отнести за счет В-клеток s-IgG и что каждый IgG указывает на принадлежность клетки памяти и ее потомства к определенному классу и аллотипу. Другие исследователи продемонстрировали наличие В-клеток S'fi+, которые восстанавливают IgG-ответ при адоптивном переносе. Кроме того, Пресс и Клинман [20] обнаружили наличие В-клеток, способных давать начало антиген-специфическим клонам, продуцирующим более одного изотипа.
И в этом случае аналогичные работы проводились двумя независимыми группами. Они использовали сортировщик флюоресцирующих активированных клеток (FACS, ФАКС) для выделения подгруппы В-клеток, несущих определен-
ный изотип, наряду с культивированием фрагментов селезенки для получения в дальнейшем антитело-секретирующих клонов. Тил и др. [12] показали, что чуть больше половины ответа вторичных клонов составляет продукт клеток s~n+, большинство из которых давало начало IgG-секретирующим клонам [12] (табл. 19.1 и 19.2). Важно отметить, что подкласс клеток памяти s-^~7+, составляющий 30% от общего ответа, давал IgG-секретирующие клоны, но только в форме IgG (±IgA), но не IgM и IgG. Очевидно, В-клетки, не экспрессирующие больше s-ц, теряют способность секретировать IgM, сохраняя при этом способность к секреции изотипов, кодируемых генами, расположенными с 3'-конца относительно гена Сн, включая изотипы IgE и IgA. Точно такие же результаты получили Джиэрхарт и Цебра [19]. При использовании ФХ в качестве антигена большинство В-клеток s-IgG+ дают клоны, продуцирующие IgG, но не IgM. Из этого можно сделать вывод о необратимости переключения с Снц на другие изотипы Сн, что согласуется с делеционной моделью экспрессии Ig.
Противоречивые результаты были получены и в ряде работ, посвященных изучению В-клеток па[мяти, экспрессирующих на поверхности IgD. В экспериментах с применением клеточного сортировщика для разделения клеток наблюдалось сохранение иммунологической памяти s-IgD+ и s-IgD“-субпопуляциями клеток памяти после адоптивного переноса в облученного хозяина. Сразу после стимуляции содержание В-клеток этих двух подклассов примерно одинаково, но со временем равновесие смещается в сторону клеток s-IgD~. В системе адоптивного переноса подгруппа В-клеток s-IgD~ восстанавливает значительно более авидный ответ [21]. Предположению о созревании В-клеток s-IgD_ в высо-коавидные клетки противоречит ряд экспериментальных данных о персистен-ции s-IgD^B-клеток памяти у примированных животных; при этом в ответах этих двух субпопуляций практически не наблюдалось никакой разницы [22].
Выделенные по отдельности s-IgD+- и s-IgD'-субпопуляции В-клеток памяти были исследованы в системе клонированных В-клеток. Оказалось, что обе подгруппы вносят значительный вклад в появление клеток иммунологической памяти, но подгруппа s-IgD- была сильно обогащена В-клетками памяти в расчете на одну В-клетку. Кроме того, обе подгруппы были способны давать клоны, секретирующие множественные изотипы, в том числе IgM. Отчетливо показано, что никаких различий в распределении изотипов между клонами субпопуляции s-IgD+ и s-IgD- не выявляется [23].
19.4.3. Связь образования изотипов с HC-Ig-маркерами клеточной поверхности
