Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Трудности, связанные с приготовлением таких антисывороток, были частично преодолены получением крысиных антимышиных моноклональных антител. Такие антитела были получены против мономорфных детерминант молекул Ly-1, Ly-2, Ly-5 и полиморфной детерминанты Ly-9 [2, 52]. Наконец недавно моноклональные ксеноантитела были использованы для разделения популяций В-лимфоцитов, особенно тех, которые находятся на ранних стадиях дифференцировки [53]. Хотя здесь мы рассмотрели ксеноантисыворотки очень кратко, они играют важную роль в иммунологии: во-первых, они обладают высокой активностью in vivo, а во-вторых, узнают не только полиморфные, но и моно-морфные антигены и могут быть поэтому использованы со всеми линиями мышей.
17.4.5. Аллоантигены лимфоцитов
Одну из основных групп поверхностных антигенов лимфоцитов мыши составляют структурные и ассоциированные антигены названного вируса. Все линии мышей заражены этим вирусом, но степень его экспрессии варьирует от линии
к линии [1, 54]. Повсеместное распространение вируса мышиной лейкемии влечет за собой несколько важных последствий. Во-первых, у всех линий мышей циркулируют в крови антитела к вирусу, способные связываться с опухолевыми клетками или клетками, экспрессирующими большое количество вирусных антигенов, и в присутствии комплемента лизировать их [1, 55]. Поэтому литиче-ское действие антисыворотки может быть связано не со специфическими антителами, а с антителами против вируса, так как наличие таких антител может приводить к ошибкам в типировании сывороток [54]. Во-вторых, имеется несколько аллоантигенных систем, которые являются частью вирусных антигенов: GIX, GSA, GCSA, а, возможно, также GRADA-1 и GERLD. Считается также, что к антигенам, ассоциированным с BMJI, относятся Х-1 и РС-1 [1].
Очевидно, что часть набора аллоантигенов поверхности лимфоцитов составляют антигены BMJI. Однако ни одно из проверенных антител к Ly не связывается со структурными белками данного вируса [56].
17.5 Функциональные исследования
Одним из наиболее важных открытий клеточной иммунологии за последние 10 лет стало наблюдение Кантора и Бойза (Cantoi-, Boysc), заметивших, что антигены Ly-1 и Ly-2/З по-разному экспрессируются на разных функциональных субпопуляциях Т-лимфоцитов [8, 9]. Согласно их данным и данным из других лабораторий, цитотоксические Т-клетки имеют фенотип Ly-I~2/3+, хелперные Т-клетки — фенотип Ly-l+2/3~, а супрессорные Т-клетки — Ly-l~2/3+ [8, 9, 57, 58]. После этих работ экспрессия Ly-1 и Ly-2/З в функциональных субпопуляциях исследовалась во множестве экспериментальных систем (табл. 17.7; гл. 3, 4, 18, 25, 26; см. также [1]). Хотя аллоантигенов Ly описано много, лишь небольшая их часть была проверена на способность маркировать функциональные субпопуляции Т-лимфоцитов. Здесь мы лишь вкратце рассмотрим результаты функциональных исследований (табл. 17.7), а заинтересованному читателю посоветуем познакомиться с приведенным в этой главе описанием индивидуальных антигенов, а также прочесть цитируемые здесь оригинальные работы и более ранние обзоры [1, 2, 8, 9, 59].
Прежде чем нерейти к обсуждению фенотипа Ly функциональных Т-клеток, следует остановиться на некоторых методических вопросах. Обычно для определения степени экспрессии антигена у функциональных клеток используют следующий метод. Клеточную популяцию обрабатывают антителами и комплементом и затем определяют функциональную активность оставшихся клеток. Потеря исследуемой активности в обработанных клетках, по-видимому, говорит о том, что эти функции осуществлялись клетками, несущими антиген и лизи-рованными при добавлении антител и комплемента. Хотя этот метод наиболее часто используется и в большинстве случаев дает воспроизводимые результаты, он имеет и ряд недостатков. Во-первых, в ранних работах такого рода использовались обычные антисыворотки, содержащие антитела к вирусам, аутоантитела, иногда антитела к другим антигенам Ly. Наблюдавшиеся эффекты могли быть вызваны именно этими загрязняющими антителами. Использование моноклональных антител позволило решить эту проблему. Во-вторых, удаляемая с помощью антител популяция клеток может содержать не эффекторные, а вспомогательные клетки, и выяснить это часто бывает непросто. В-третьих, для лизиса клеток с помощью комплемента количество антигена на них должно быть выше некоего критического минимума. Клетки, имеющие небольшое, хотя
и выявляемое количество антигена, могут избежать лизиса, и тогда будет казаться, что они совсем не имеют антигена, хотя на деле он есть, но его просто очень мало. В-четвертых, различия в активности разных препаратов антител могут приводить к ошибочным результатам — и, следовательно, эту проблему можно решить с помощью моноклональных антител, поскольку эти антитела гомогенны и их можно получить в больших количествах. Наконец, в-пятых, чтобы быть уверенным в правильности результатов, полученных этим методом, следует использовать методы положительной селекции, т.е. выделять популяцию клеток, реагирующих с антителами, определять их функцию, а затем с их помощью восстанавливать функциональные свойства популяции, у которой содержащие антиген клетки были удалены. С учетом всех этих обстоятельств можно построить следующую общую классификацию Т-клеток.
