Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
10. Robinson D. M. Repair of freezing injury in mammalian cells grown in serial culture//Cryobiology. 1973. Vol. 10. P. 413—420.
11. Rudiger H. W., Wohler W., Bohmer H. V., Passarge E. Cooling velocity and cell recovery//Nature. 1975. Vol. 254. P. 361.
12. Yasukawa М., Terasima Т., Yamada М., Matsumara T. Inactivation of proliferative capacity of cultured mammalian cells by liquid nitrogen storage procedure // Cryobiology. 1974. Vol. 11. P. 493—499.
13. Криоконсервация клеточных суспензий / Под ред. А. А. Цуцаевой. Киев, 1983. 148 с.
14. (Farrant }.) Фаррант Д. Пересмотр некоторых криобиологических концепций // Криобиология и криомедицина. Киев, 1977. Вып. 3. С. 12—20.
15. Farrant 3. Mechanism of cell damage during freezing and thawing and its prevention //Nature. 1965. Vol. 205. P. 1284—1289.
16. Пушкарь H. С., Шраго М. И., Белоус А. М., Калугин Ю. В. Криопротекторы. Киев, 1978. 204 с.
17. Глушко Т. А. Особенности пролиферации клеточных культур после контакта с криопротекторами: Автореф. дис. . . . канд. биол. наук. Харьков, 1983. 22 с.
18. Lovelock J. Е. The mechanism of the protective action of glycerol against haemolysis by freezing and thawing //Biochem. biophys. acta. 1953. Vol. 11, N 1. P. 28—36.
19. Matthes G., Hackensellner H. A. Correlation between purity of dimethyl sulfoxide and survival after freezing and thawing //Cryo-Letters. 1981. Vol. 2. P. 389—392.
20. Малахова И. В., Зорин Е. В., Новохатский А. С. Хранение и восстановление гибридом, продуцирующих моноклональные антитела к вирусным антигенам// Молекуляр. генетика, микробиология, вирусология. 1985. № 6. С. 41—44.
21. Tsonoev L, Aleksiev N.. Nicolov Ch., Tsvetkov Т., Milev A. Studies equilibration of AteSO in a platelet suspension // Cryobiology. 1979. Vol. 16. P. 601.
22. Ashwood-Smith M. J., Warby C., Connor К W., Becker G. Low temperature preservation of mammalian cell in tissue culture with polyvinil pyrrolidone (PVP), dextrans and hydroxyethyl (HES) // Cryobiology. 1972. N 9. P. 441—449.
23. Maack P., Rieger P., Piidiger H. W. Recovery after freezing and thawing human diploid fibroblasts // Cryobiology. 1982. Vol. 19. P. 10—16.
24. Farrant S., Walter C. A., Heather Lee ?., McGann L. E. Use of two-step cooling procedures to examine factors influencing cell survival following freezing and thawing // Cryobiology. 1977. Vol. 14. P. 273—286.
25. McGann L. E., Kruuv ]., Frey H. E. The repair of freezing damage in mammalian cells//Cryobiology. 1972. Vol. 9. P. 496—501.
26. McGann L. E., Kruuv J., Frim ]., Frey H. E. Factors affecting the repair of sublethal freeze-thaw damage in mammalian cells. 1. Suboptimal temperature and hypoxia // Cryobiology. 1974. Vol. 11. P. 530—539.
27. McGann L. E., Kruuv ]., Frim ]., Frey H. E. Factors affecting the repair of sublethal freeze-thaw damage in mammalian cells. 2. The effect of ouabain // Cryobiology. 1974. Vol. 11. P. 332—339.
28. Цуцаева А. А., Иткин Ю. А., Петренко Т. Ф. и др. Методические рекомендации на технологический процесс криоконсервации перевиваемых клеточных линий. Харьков, 1985. 16 с.
29. Валеева И. X., Мохова Е. Н. Полярографическим методом изучение функционального состояния митохондрий в лимфоцитах. Регуляция энергетического обмена и физиологическое состояние организма. М., 1978. С. 187—189.
Криоконсервация клеток растений
А. С. П о п о в
Институт физиологии растений им. К. А. Тимирязева
АН СССР, Москва
Для большинства соматических клеток всех и спермиев ряда видов животных криоконсервация давно стала рутинной процедурой. В то же время за 18 лет, прошедших после первых попыток [1, 2], и за 13 лет с начала интенсивной разработки этой проблемы для клеток растений [3] все еще нет универсального метода, пригодного для криосохранения клеток всех или многих видов. Более того, как правило, даже штаммы, производные от одного исходного, требуют разных условий на некоторых важных этапах этой экстремальной процедуры [4]. И все же во всем мире за эти годы достигнуто криосохранение (при —196 °С) культур клеток примерно 30 видов растений и культур апикальных меристем еще 25 видов [5].
Причина такого сравнительно медленного продвижения связана не только с недостаточностью внимания к этой проблеме, но прежде всего со спецификой растительных клеток: большими размерами,-сильной вакуолизацией, обилием воды и чрезвычайной широтой и пластичностью их метаболизма, поскольку они находятся в значительно более изменчивых условиях, чем условия строгого гомеостаза внутренней среды, которая окружает клетки животных. Поэтому выживаемость клеток после оттаивания даже в лучших, редких случаях не превышает 60—70 %.
Повреждения клеток при замораживании и последующем оттаивании зависят, с одной стороны, от образования льда внутри их, а с другой — от их дегидратации. Опасен рост центров кристаллизации в крупные кристаллы (более 0.1 мкм), чьи грани разрушают эндомембраны [6]. Скорость роста кристаллов сильно возрастает при увеличении степени переохлаждения воды. Полностью рост и перестройка кристаллов льда прекращаются в чистой воде только около —140 °С [7]. Вот почему длительное уверенное хранение возможно только при более низких температурах. Точка замерзания цитоплазмы около —1 °С, проникающие криопротекторы понижают ее в соответствии со своим —At, например, для 10%-ного ДМСО At = =—3.5 °С [8], но клетки обычно остаются незамерзшими до —10 —15 °С, так как до этих температур плазмалемма еще предотвращает проникновение внутрь кристаллов льда, растущих во внешнем растворе [7]. Следовательно, к моменту инициации кристаллизации в клетке уже существует значительное переохлаждение, что очень неблагоприятно. Но если температура снижается достаточно медленно, то свободная вода успевает выйти из клетки, замерзая на поверхности кристаллов в растворе [7]. Происходит значительная дегидратация и сжатие протопласта. Возникающие повреждения могут иметь различные механизмы [9], но ведущую роль для клеток растений, если внутри них не образуются большие кристаллы льда, при снижении температуры до —25 °С и ниже играет чрезмерный
