Аффинная хроматография - Туркова Я.
Скачать (прямая ссылка):
качественной реакции.
Реагент для количественного определения
8 мл пиридина медленно смешивают с 1,6 мл конц. HCI (ч.д, а.) при
охлаждении, добавляют 50 мг барбитуровой кислоты и доводят объем до 10 мл
водой. Реагент для количественного определения следует готовить
непосредственно перед использованием.
Дополнения
451
СН
окисление
см+ пиридин
О
2НдО
С
N
0 = CH-CH = CH-CH2-CH=0 + (HN = С = N)-+ 2Н +
глутаконовыи альдегид
+ 2 молекулы " барбитуровом , кислоты
О
О
II
II
темно-красный продукт
Качественное обнаружение свободного BrCN или цианатных эфиров
активированных полисахаридов
К 10-20 мг сухого илн 0,1-1,0 мл набухшего влажного полисахарида или к
нескольким каплям водных промывок свежеактивированного материала
добавляют 1,2 мл реагента для качественной реакции. После легкого
встряхивания в присутствии <5 нмоль BrCN илн цианатиого эфира возникает
темно-красное окрашивание. Окраска развивается в течение 30 с и
становится максимальной через 10 мин.
Калибровочный график
Для приготовления стандартных растворов ( ~ 1-10 мкмоль/мл) реагента,
содержащего CN+'Ионы, используются большие одиночные кристаллы свежесуб-
лимированного BrON. После реакции со свежеприготовленным
стехиометрическим количеством реагента (10 мл) при 40 °С в течение 15 мин
es7s составляет 15 000 моль_'-л-см-1. Калибровочный график Аыь-[CN+]
линеен до [CN+]=60 нмоль/мл.
Количественное определение цитатных эфиров полисахаридов К образцу
полисахарида, содержащему от 1 до 20 мкмоль цианатных эфирных групп,
добавляют 10 мл реагента для количественного определения. Смесь
выдерживают в течение 15 мни на водяной бане (40 °С) прн энергичном
встряхивании, затем фильтруют через стеклянный фильтр. Осадок тщательно
промывают водой. Окраска может глубоко проникнуть в полисахарид, однако
промывание несколькими миллилитрами диметилформамида приводит к удалению
адсорбированной окраски, и полисахарид остается лишь слабо-розовым.
Объединенный фильтрат доводят до определенного объема дистиллированной
водой н измеряют оптическую плотность раствора при 575 нм.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Kohn Wilchek М., Biochem. and Biophys. Res. Comm,, 84, 7-14 (1978).
2. Konig W" J, Pract. Chem., 69, 105-110 (1904).
452
Дополнения
К главе 11
В работе Олсона и др. [1] при разделении ферментов и антигенов аффинной
хроматографией применялись методы высокоэффективной жидкостной
хроматографии, которую отличают использование небольших колонок, высоких
скоростей разделения, связанных с этим высоких давлений в системе и, что
наиболее существенно, относительно небольших количеств анализируемых
веществ. Носителем для иммобилизации аффинных лигандов служил силикагель,
поскольку получаемые аффинные сорбенты на этом носителе могут работать в
условиях высокого давления. Наиболее ярким примером эффективности такого
метода служит разделение в течение 5 мин Н4 и М* изозимов
лактатдегидрогеиазы на колонке с N6-(6-аминогексил)-АМР-силикагелем в
градиенте NADH.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ohlson S" Hansson Larsson P, О., Mosbach К., FEBS Letters, 93, 5-9
(1978).
предметный указатель хроматографируемых ВЕЩЕСТВ
Авидин 124, 337 Агароза 297
Агглютинации фактор 361
Агглютинин(ы) 339 аксинеллы 340 Аденилатциклаза 297
й-Аденознл-Ь-метионнн-декарбоксилаза 297 Аденозин 334 Аденоэннмоиофосфаты
зависимые ферменты 297 Зг,5'цикломонофОсфагы 344 цнклорецепториые белки
349 Аденозинтрифосфатаза 297, 315 мембраносвязаннан 315
Адренокортнкотропный гормон 336 Адренергический рецептор 349 Акрозин 317
Актйи 361
Аланннкарбокснпептидаза 317 Алкогольдегидрогеназа 112, 300 из дрожжей 60,
268 Альбумин 349 связанный с веществами 361 сыворотки см. Сывороточный
альбумин - человека 290 Алыиназы 297 Альдегндоксндаза 313
Альдегидредуктаза 385 Альдодаза 162
Альдосгеронсвязывающие макромолекулы
349
Амилаза 162 а-Амилаза 297 Р-Амилаэа 298
Амииоацил-тРНК-СНЯтетаза 164" 327
Амннокислотусаязывающне глнколротенны
1349
Аминокислоты специфические 358-360 Аминоксндаза 313 Аминопептидаза 317
Ангндрохимотрнпсин 332 Ангиотензин I, ферментпревращаюгций 317
Ангиотензин, сывороточный прогормои 337 Антн А-агглютинин 340
Антиагглютннин соевых бобов v-глобулин 289
Анти-В-гемагглютннин 340 Антигви(ы) 290 карциноэмбрнонный, нммуноактнвиая
фракция 362 Антитела 2&3-290
антисыворотка к Ct-фитопротеииу 280 актисыворотка к Shigella Sonnei 280
антитироглобулин, аутоаититела 280 Огантитрнпснн 337 Антк-А
фитогемагглютнннн 340 Антранилатекнтаза 327
Антранилатфосфорибозилтрайсфераза 329 Апоглутаматоксалоацетаттрансамииаза
298 Апо-Р-оксибутиратдегидрогеназа 300 Апотирозннфеиоллназа 298
Апотриптофаназа 298 Арабинозокиназа 309 Аргиназа 298 Арилсульфатазы 298
Асларагинаэа 298 модифицированная тетранитрометяном 298
Аепартаза 299
Аспартатамкнотрансфераза 330 Аспартат-^-декарбокснлаза 299
Аспаргаттранскарбамнлаэа 299 Аспартокнназа 1 - гомосериидегндрогеназа 300
Ацетил-СоА-апокарбоксилаза 296 АцетилглюкозаминЯдаза 306 N-Ацетнл-^-
глюкоэамидаза 296 N - Ацетил- О-глюкозаминсвязываюший белок 349
