Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
2 г листьев, растирают с кварцевым песком и с 20 мл 5 %-го раствора метафосфорной кислоты (НР03) до состояния однородной кашицы, которую переносят через воронку в мерную колбу на 50' мл, смывая ступку остатком ИРОз. Содержание колбы доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и настаивают 5 мин. Затем взбалтывают колбу 2.. .3 мин и фильтруют содержимое через сухой складчатый фильтр в сухую колбу.
Для определения содержания аскорбиновой кислоты в два бюкса берут по 5 мл фильтрата и титруют из бюретки 0,001 и. раствором 2,6-дихлорфенолиидофе-нола до слабо-розового окрашивания, сохраняющегося в течение 1 мин.
Для определения количества глутатиона и общей редуцирующей активности наливают по 5 мл фильтрата в два других бюкса, добавляют две-три капли 15 %-го раствора KI, пять капель 1 %-го раствора крахмала и титруют из другой бюретки 0,001 и. раствором КЮз до слабо-синего окрашивания, сохраняющегося 1 мин.
Содержание аскорбиновой кислоты (А) и глутатиона (Г), а также редуцирующую активность (Ра) растительной ткани рассчитывают по следующим формулам:
(аК) • 0,088-М-100
= —'—L-------------, М г % ;
тп
ф-аК) -0,307-М- 100
Г -----------------_---, мгп/о ;
та
ЬМ• 100
Р-----------s МЛ,
тп
где а — количество 2,6-дихлорфенолиндофсиола, пошедшего на титрование, мл; Ь — количество йодата калия, израсходованное па титрование, мл; /< — соотношение объемов:
йодата калия, мл
2,6-дихлорфенолиндофеиола, мл
0,088 — количество восстановленной аскорбиновой кислоты, мл, эквивалентное 1 мл 0,001 и, раствора краски; 0,307 —- количество восстановленного глутатиона, мг, эквивалентное 1 мл 0,001 и. раствора йодата калия; п—навеска материала, мг; М — общий объ-
ем экстракта, мл; т — объем экстракта, взятого для титрования, мл.
Для приготовления раствора аскорбиновой кислоты на 2 %-м растворе метафосфорной кислоты в мерную колбу на 50 мл наливают 20 мл 5 %-го раствора НР03, бросают кристаллик аскорбиновой кислоты и доводят жидкость в колбе до метки дистиллированной водой. Оттитровывают 5 мл полученного раствора в двукратной повторности раствором краски и раствором йодата калия, как указано выше, и рассчитывают соотношение объемов.
Содержание аскорбиновой кислоты, глутатиона и общую восстановительную активность определяют в листьях верхнего и нижнего ярусов. В качестве объектов можно использовать также проростки сельскохозяйственных культур, выращенных в разных условиях питания, освещения и влажности.
Результаты опыта записывают по форме (табл. 32).
32. Схема записи результатов опыта
Ярус Навескя Объем экстракта, мл Пошло па титровагие
аскорбиновой кислоты, мл
лктьер, 1 общш'г для титро краски К ю3
вания
1 2 3 4 5
Верхний
Нижний
Продолжение
Ярус Отноше Пошло па тит Содержание, мг% Общая редуци
ние объе рование филь массы сырых листьев рующая аюив-
мов КЮ3 трата, мл иость, мл 0,001 н.
краска
1 6 7 8 9 10 11
Верхний
Нижний
Материалы и оборудование. Растение с листьями нескольких ярусов, проростки пшеницы или другой культуры, 20 %-й раствор метафосфорной кислоты, 0,001 н. раствор йодата калия, 15 %-й раствор йодида калия, 1 %-й раствор крахмала, 0,001 н. раствор
2,6-дихлорфенолиндофеиола, кристаллическая аскорбиновая кислота, кварцевый песок. .
Бюретки, пипетки на 10 мл и иа 1 мл, мерные колбы иа 50 мл, конические колбы на 100 мл, воронки, фильтры, весы с разновесами, мерные цилиндры иа 25 мл.
Работа 52. НАБЛЮДЕНИЕ ЗА ДЕЙСТВИЕМ ДИНИТРОФЕНОЛА НА ПОСТУПЛЕНИЕ ВОДЫ В ТКАНЬ КЛУБНЯ КАРТОФЕЛЯ
Вводные пояснения. 2,4-дшштрофенол (2,4-ДНФ) — специфический яд, который, не изменяя или даже усиливая дыхание, разобщает процессы окисления и фосфорилироваиия в митохондриях. В результате снижается или прекращается новообразование АТФ, что ведет к подавлению процессов, зависящих от энергии дыхания. Нарушается также структура и избирательная проницаемость мембран, для поддержания которой необходима затрата энергии дыхания. Эти изменения проводят к снижению способности клеток поглощать и удерживать воду.
Цель работы — выявить необходимость энергии дыхания для поддержания физиологических функций растительных тканей.
Порядок работы. Из клубня картофеля нарезают ножом десять пластинок длиной, и шириной около 1,5 см и толщиной 2.. .3 мм. Разделяют их на две группы, каждую взвешивают и помещают в бюксы. Одну группу пластинок заливают 15 мл водопроводной воды, другую—15 мл насыщенного раствора динитрофенола и оставляют в открытых бюксах при комнатной температуре на 1,5. .,2 ч. Затем пластинки вынимают, просушивают фильтровальной бумагой и снова взвешивают.
