Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
6. Залейте стекло сафранином и оставьте на 1 мин. Отмойте краситель водой. Осторожно просушите стекло между слоями чистой фильтровальной бумаги и дайте ему окончательно высохнуть на воздухе. Сафранин является дополнительным красителем. Он применяется после кристаллического фиолетового и окрашивает все грамотрицательные бактерии в красный цвет.
7. Нанесите на мазок каплю иммерсионного масла и рассмотрите препарат под иммерсионным объективом (разд. 5.11.2).
Результаты
Согласуются ли ваши наблюдения с тем, что написано в разд. 12.9.1 о содержании бактерий в молоке?
Опыт 12-3. Сравнение численности бактерий в свежем и несвежем молоке
Если одиночную бактерию поместить на питательный агар, она начнет делиться и образует колонию, которая в отличие от исходной клетки видна невооруженным глазом. Это свойство можно использовать для подсчета бактерий.
Простерилизуйте оборудование. Первая часть опыта основана на использовании метода серийных разведений. Число бактерий в молоке огромно, поэтому для подсчета удобнее взять пробу небольшого объема и развести ее в известное число раз. Приготовьте серии разведений. Во второй части опыта из каждого разведения отберите пробу для посева. Для подсчета числа бактерий в определенном объеме молока (т. е. титра) используйте ту чашку, на которой после инкубации выросло наиболее подходящее число колоний (достаточно большое, но без перекрывания колоний).
Материалы и оборудование
Шесть стерильных чашек с питательным агаром
Восемь градуированных пипеток на 1 см3
Градуированная пипетка на 10 см3
Шесть пробирок и штатив для них
Хлопковая вата
Печь на 160 °С
Несмываемый маркер
Бунзеновская горелка
100 см3 дистиллированной воды
Свежее молоко
Несвежее молоко
70%-ный спирт
Алюминиевая фольга
Стеклянный шпатель
Стерилизация оборудования
1. Закройте каждую из шести пробирок ватной пробкой; пробки плотно оберните алюминиевой фольгой.
2. В кончик каждой из восьми пипеток на 1 см3 и одной пипетки на 10 см3 поместите небольшой комочек ваты и заверните каждую пипетку отдельно в алюминиевую фольгу.
3. Положите пробки и пипетки в горячую суховоздушную печь, нагретую до 160 0C, и оставьте их там на 60 мин (колбы со сре-
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
дой и водой в такой печи стерилизовать нельзя).
4. Перед использованием дайте оборудованию остыть.
Серийное разведение молока и посев клеток на чашки с агаром
1. Подпишите шесть стерильных, закрытых пробками пробирок, пометив их Cl, С2, СЗ, Hl, Н2 и НЗ. Снимите с пробок алюминиевую фольгу.
2. Подпишите донышки шести стерильных чашек с питательным агаром Cl, С2, СЗ, Н1,Н2иНЗ.
3. Внесите в каждую из шести пробирок по 9,9 см3 стерильной дистиллированной воды. Для этого воспользуйтесь следующими приемами.
а) Мизинцем и безымянным пальцем одной руки выньте ватную пробку из колбы со стерильной дистиллированной водой.
б) Держа пробку одной рукой, другой рукой возьмите стерильную пипетку на 10 см3 и наберите из колбы 9,9 см3 стерильной дистиллированной воды.
в) Закройте колбу пробкой.
г) Точно таким же способом, как в пункте я, выньте пробку из первой пробирки.
о) Перенесите 9,9 см3 воды в эту пробирку.
ё) Закройте пробку.
ж) То же самое проделайте с остальными пятью пробирками.
4. Хорошо встряхните пробу свежего молока и, взяв стерильную пипетку на 1 см3, перенесите 0,1 см3 молока в пробирку Cl. Пробку вынимают и помещают обратно так же, как и раньше. Получается разведение в 100 раз.
5. Мягко встряхните пробирку, чтобы хорошо перемешать содержимое.
_Микробиология и биотехнология 61
6. Возьмите новую стерильную пипетку и перенесите 0,1 см3 из пробирки Cl в стерильную чашку, помеченную Cl, лишь слегка приоткрывая крышку чашки.
7. Простерилизуйте стеклянный шпатель; для этого окуните его в 70%-ный спирт, дайте стечь избытку спирта и затем подержите шпатель вертикально в пламени бун-зеновской горелки.
8. Дайте шпателю остыть и холодным шпателем разотрите пробу молока по поверхности чашки.
9. Снова простерилизуйте шпатель.
10. Используя ту же пипетку, что и в пункте 6, перенесите 0,1 см3 из пробирки Cl в пробирку С2, вынув и поместив ватную пробку на место, как указано выше.
11. Хорошо перемешайте пробу, встряхнув пробирку С2. Получается разведение в 10 000 раз.
12. Повторите операции, указанные в пунктах 10—11, используя СЗ вместо С2. Это дает разведение в 1 000 000 раз. Повторите операции, указанные в пунктах 6—9, используя СЗ вместо Cl.
13. Повторите серийные разведения, используя в качестве проб несвежее молоко, и приготовьте чашки Hl, Н2 и НЗ.
14. Переверните приготовленные шесть чашек донышками вверх и поставьте примерно на 3 сут в термостат при 35 °С.
15. Скрепите крышки и донышки чашек липкой лентой, чтобы избежать возможного распространения патогенных микроорганизмов.
16. Оцените рост бактерий на чашках. Где удастся, подсчитайте число отдельных колоний. Запишите полученные результаты в виде таблицы и рассчитайте по ним число бактерий в 1 см3 неразбавленного молока.