Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
При использовании больших объемов среды культуру перемешивают, чтобы предотвратить оседание клеток. Для этой цели применяют механические встряхиватели или магнитные мешалки. Кроме того, пропускают стерильный воздух через среду, чтобы обеспечить поддержание оптимальной концентрации кислорода по всей среде. Для фильтрации воздуха и его стерилизации используют имеющиеся в продаже фильтры либо фильтры из стеклянной или неабсорбирующей хлопковой ваты. Воздух поступает через распылитель — устройство с множеством маленьких отверстий, позволяющее получать идеальные пузырьки. Его крепят на конце трубки, идущей ко дну сосуда с культурой. Жидкие культуры можно выращивать в виде периодических культур или непрерывных культур (разд. 12.10).
12.2.2. Обогащенные и селективные среды
Обогащенная среда — это среда, компоненты которой составлены таким образом, чтобы максимально удовлетворить потребности определенных микроорганизмов; таким образом им обеспечивается предпочтительный рост по сравнению с другими. При внесении в среду смешанной культуры, которую чаще всего выделяют из «природы», обычно растет преимущественно один или несколько типов микроорганизмов. Используя подходящую среду, можно избирательно выращивать нужный микроорганизм. Изменяя условия, такие как температура, pH, источник углерода и источник энергии, можно подобрать такую их комбинацию, которая максимально подходит для данного организма. К примеру, бактерии рода Salmonella, являющиеся возбудителями тифа (Salmonella typhi), выделяют и идентифицируют, помещая образцы пищи или фекалий в среду, содержащую селеновые производные (селен — элемент, по свойствам напоминающий серу). Обычные кишечные бактерии, например E coli, которые тоже могут присутствовать в фекалиях, подавляются селеном. Обогащенная культура — один из наиболее мощных инструментов, используемых микробиологами для выделения микроорганизмов.
БОТАНИКА_
Селективная среда — это среда, в которую добавляются вещества, подавляющие рост всех организмов, за исключением одного или нескольких. Примером может служить добавление пенициллина к культуре с целью отбора устойчивых к нему организмов, или отбор гибридных клеток в процессе производства моноклональных антител (разд. 12.11.2).
12.4. Как можно выделить из почвы организм, который в качестве единственного источника азота использует атмосферный азот (азотфиксирующий организм)?
12.2.3. Индикаторные среды
Индикаторные среды содержат индикатор, который позволяет визуально отличать одни организмы от других. К примеру, определенные бактерии разрушают («сбраживают») сахар лактозу до кислоты. В среде, получившей название агар Макконки, которая содержит pH-индикатор нейтральный красный и желчные соли, колонии, сбраживающие лактозу, будут выглядеть красными, а не сбраживающие лактозу — бесцветными или бледно-розовыми. Этот метод используют, например, для выявления загрязнения питьевой воды сточными водами. Сточные воды содержат кишечные бактерии, такие как Е. coli, которые сбраживают лактозу. Точно так же, если в образце кишечных бактерий присутствует Salmonella, то на агаре Макконки она будет образовывать бесцветные колонии.
12.2.4. Готовые среды
Сухие среды, содержащие агар и все необходимые компоненты, имеются в продаже. Обычно их выдерживают 15 мин в воде и затем, чтобы простерилизовать, автоклавируют в колбах или флаконах в течение 15 мин при 121 °С. В процессе автоклавирования среда перемешивается и растворяется. Внутри автоклава под давлением кипит вода. Автоклав закрывается крышкой с защитным клапаном, выпускающим пар, когда достигнуто необходимое давление. Чем выше давление, тем выше температура кипения воды. Так стерилизуют растворы и оборудование, например, стеклянную посуду. Чтобы убить всех бактерий и их устойчивые споры, обычно
ММА им. И.М. Сеченова
Микробиология и биотехнология 45
Рис. 12.2. Современная микробиологическая лаборатория с ламинарным боксом.
достаточно 15—20 мин инкубации при давлении 103 кПа (кН/м2). При таком давлении температура внутри автоклава достигает 121 °С.
12.3. Меры асептики
Соблюдение мер асептики — это использование стерильного оборудования и растворов и предотвращение их загрязнения в процессе работы. Бактерии и споры грибов широко распространены в окружающей среде, в том числе и в лабораториях. Микробиологи должны постоянно заботиться о стерильности питательной среды и оборудования. Эти «неудобства» — неотъемлимая часть работы любого микробиолога. В лабораториях школ и колледжей учат только основным мерам предосторожности. Для рутинной микробиологической работы необходимы особым образом оборудованные лаборатории. Они должны иметь поверхности, которые легко очищать, и специально отгороженные места для работы (боксы), где обеспечивается подача фильтрованного стерильного воздуха(рис. 12.2).
12.3.1. Заливка чашек
Это один из самых основных микробиологических методов. Чашкой называют чашку Петри, содержащую питательный агар. Чашки Петри — специально изготовленные неглубокие круглые контейнеры, которые могут быть стеклянными или пластиковыми. Они используются для роста бактерий, грибов иди культуры тканей на твердой питательной среде. Обычно чашки Петри
