Практикум по цитологии растений - Паушева З.П.
ISBN 5-10-000614-5
Скачать (прямая ссылка):
Метод работы основан на сравнении показателей микроамперметра, полученных при установке эталона, с показаниями при установке объекта.
Цитоинтерферометрия
Для определения сухой массы клеток и клеточных структур используют несколько методов: авторадиографию (с рентгеновской установкой), электронно-микроскопическую цитохимию и интерференционную микроскопию. Последний метод дает возможность работать как с фиксированными, так и с живыми клетками.
В интерференционном микроскопе с ртутной лампой луч расщепляется в определенной точке на два луча: один идет через объект, а второй — через среду. В другой точке оба луча интерферируют одновременно. В результате совпадения фаз результирующее колебание будет иметь двойную амплитуду.
В интерференционном микроскопе используют монохроматическое освещение. При наличии прозрачного биологического объекта лучи будут встречаться после расщепления, имея отличия по фазе, т. е. возникает оптическая разность хода лучей Д.
Для определения сухой массы (Р) используют формулу р _ или р — 5 5 100а
где S — площадь объекта, а — константа, равная 0,0018.
Для измерения разности хода лучей используют освещение поляризованным светом в интерференционном микроскопе. При отсутствии объекта после интерференции двух лучей возникает линейно поляризованный свет; после прохождения через объект направление поляризованного света меняется на некоторый угол. Для оценки разности хода лучей применяют компенсатор, помещаемый перед фотоумножителем.
Из препаратов в интерферометрии часто используют мазки и следят, чтобы объекты не поглощали свет в диапазоне 546 нм. В качестве заключающей среды можно брать дистиллированную воду и глицерин, если разность хода лучей между объектом и средой превышает длину волны.
В интерференционном- микроскопе СИИМ-1 источником света служит ртутная лампа ДРШ-250. Изображение объекта пере-дается объективом в плоскость зоны сканирующего устройства. (После зонда изображение проектируется на фотокатод фотоэлектронного умножителя и поступает в фазометр.
ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ВО ВРЕМЯ ПРАКТИЧЕСКИХ РАБОТ
Техника безопасности — это система технических средств и приемов работы, обеспечивающих безопасность труда. В условиях лаборатории цитологии к ним относятся:
изоляция вредных газов, испаряющихся жидкостей, излучений, легковоспламеняющихся и ядовитых веществ;
исправность электрооборудования (термостаты, плитки, водяные бани, трансформаторы и т. д.)» надежно работающий вытяжной шкаф (под тягой находятся газовые горелки, термостат с парафином, готовят реактивы); бокс для ряда реактивов; сейф для ядовитых веществ; посуда с притертыми крышками;
размещение микротомов с ножами в специальных футлярах. В лаборатории должны быть инструкции по технике безопасности, аптечка, халаты, перчатки, защитные очки, песок, одеяло, огнетушитель.
Следует соблюдать осторожность при работе с реактивами во время их переливания,. нагревания, переноса и т. д. В лаборатории нельзя хранить кислоты, эфир, ксилол, бензин и другие легковоспламеняющиеся жидкости. Нельзя работать с неисправными электроприборами.
Запрещается пробовать на вкус реактивы, набирать ртом в пипетки растворы кислот и щелочей, брать голыми руками колбы с кипящйми растворами, поднимать корзины с бутылями кислот и щелочей, не проверив надежность их дна.
Работать с ксилолом, хлороформом, формалином, колхицином необходимо в перчатках под тягой.
Спиртовку во время работы ставят так, чтобы пламя не обожгло работающего. Наготове должна быть тряпка, которой можно закрыть спиртовку в случае ее воспламенения.
При матировании предметных стекол с использованием ручного' точила и подогревании на спиртовке красителей необходимо надевать защитные очки.
Фрамуги и форточки в лаборатории должны быть открыты для постоянного притока свежего воздуха. Следует иметь также на окнах шторы для затемнения.
Перед уходом из лаборатории выключают газ, электроприборы, свет, проверяют, хорошо ли закрыты водопроводные краны.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ЗАНЯТИЯ ПО ИЗУЧЕНИЮ КЛЕТКИ
СТРОЕНИЕ КЛЕТКИ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ
Клетка — это структурная единица, лежащая в основе строения и функционирования организма. Изучение клетки путем использования разных методов наблюдения под микроскопом требует определенных знаний о ее строении, о том, какие структурные компоненты можно увидеть в световой микроскоп, учитывая, с одной стороны, их величину, а с другой — разрешающую способность разных объективов микроскопа и методы .исследования.
Известны два типа клеточной организации: прокариоты и эукариоты. Отличия прокариот от эукариот даны ниже на примере бактерий.
По современным представлениям, в клетке растений размером от 20 до 300 мкм принято различать ядро и цитоплазму, которые, несмотря на резко выраженное функциональное различие, тесно связаны между собой ядерио-цитоплазматическим взаимодействием, и клеточную стенку.
При помощи светового микроскопа в цитоплазме можно обнаружить пластиды, митохондрии, сферосомы, пероксисомы, вакуоли. Электронный микроскоп позволяет изучить ультра структуру перечисленных компонентов и выявить невидимые в световой микроскоп структуры: эндоплазматический ретикулум, рибосомы, микротрубочки, аппарат Гольджи, лизосомы.
