Происхождение предбиологических систем - Опарин А.И.
Скачать (прямая ссылка):
Фиг. 3 иллюстрирует схему опытов, поставленных с целью предварительной характеристики этих соединений. Исходные вещества сначала инкубировали с бактериальной щелочной фосфатазой
220 230 Ж 250 260 270 280 290
Длина волны, ммк
Фиг. 2. Ультрафиолетовый спектр поглощения полимера цитидиловой кислоты (2-75/2) в 0,01 н. НС1 (1) и в 0,1 н. NaOH до (3) и после (2) инкубации в течение 48 час при 37°.
(для гидролиза фосфомоноэфирных связей). Количество неорганического фосфата, выделившегося при этом, показывало число концевых групп в расчете на молекулу. Одновременно ставили контрольные опыты для определения содержания фосфата в ферментных
2-75/2
+
Фосфатаза
137° Определение Фн
Фосфатаза
137° Определение Фн
2-75/2
137° Определение Фн
/ / Ni
Добавление Добавление
37° РНК-азы 37° РНК-азы
V i37° ' 137°
37°
Определение
Фн
Определение
Фн
Определение
Фн
Определение
Ф„
Определение
ФН
Фиг. 3. Ферментативное расщепление полимера цитидиловой кислоты (2-75/2) бактериальной щелочной фосфатазой и рибонуклеазой поджелудочной железы.
препаратах и для оценки спонтанного гидролиза полинуклеотида (как оказалось, последним процессом можно пренебречь). После окончания гидролиза опытную и контрольную пробы делили
25 мл
51мл
53 мл
иг. 4. Действие рибонуклеазы на величину молекул полимера ци ловой кислоты (2-75/2).
— полимер 2-75/2; 2 — при действии фосфатазы; 3 — при действии фосфатазы и нуклеазы; 4 — поли-Ц; 5 — ЦМФ.
пополам, и к одной из двух параллельных проб добавляли рибону-клеазу (из поджелудочной железы) и, если необходимо, фосфатазу. Такая постановка опытов позволяла иметь контроль не только на загрязнение ферментных препаратов и спонтанный гидролиз, но и на фоновую фосфатазную активность во время воздействия рибонуклеазы.
Если во время этого воздействия происходило освобождение дополнительных количеств неорганического фосфата, то это могло быть лишь результатом образования новых концевых групп, которые подвергались затем действию уже присутствовавшей фосфатазы. В этих опытах были получены предварительные данные об ограниченном действии рибонуклеазы, т. е. о присутствии З'-фосфо-диэфирных связей в некоторых из синтезированных соединений.
Предположение о том, что освобождение дополнительного неорганического фосфата при действии рибонуклеазы действительно происходит вследствие расщепления полимера ферментом, получило дальнейшее подтверждение в опытах, результаты которых приведены на фиг. 4. Пики показывают объемы элюатов, полученных при фильтрации полимеров через сефадекс G25 (растворитель
1 н. NaCl). После полного элюирования со смолы полимера (в данном случае использовали ферментативно синтезированную поли-цитидиловую кислоту) объем элюата оказался равным 25 мл (фиг. 4, 4). Объем элюата для случая низкомолекулярных веществ, для которых наблюдается максимальная задержка [в данном опыте использовали 2'(3')-цитидинмонофосфат], равнялся 51 мл (фиг. 4, 5). Кривая 1 (фиг. 4) дает картину нормальной элюции соединения 2-75/2; объем элюата 35 мл. Инкубация соединения 2-75/2 с бактериальной щелочной фосфатазой (фиг. 4, 2) не влияет на размер молекул полимера. При добавлении рибонуклеазы из поджелудочной железы (фиг. 4, 3) объем элюата возрастает до 53 мл\ это максимальный объем, полученный для соединений с низким молекулярным весом. Тот факт, что пик достаточно широк и имеет небольшое плечо, соответствующее объему 35 мл, позволяет считать, что разрушение рибонуклеазой было неполным. Результаты уже описанных опытов суммированы в табл. 3.
Представленные в табл. 3 данные показывают относительное количество фосфата, освобожденного при действии фосфатазы (иными словами, процентное содержание фосфата концевых групп) и количество фосфата, освобожденного при действии рибонуклеазы (в процентах к общему фосфору). Поскольку для синтеза полимера использовали цитидиловую кислоту, представлявшую собой смесь 2'- и З'-цитидиловых кислот, при конденсации должно было образоваться примерно равное количество 2'- и З'-связей. Если рибо-нуклеаза специфически воздействует на З'-связи, то можно считать, что в образовании фосфодиэфирных связей участвует вдвое боль-
Таблица 3 Результаты ферментативных опытов
Число Количество освобожденного
