Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Судьба эксплантата при культивировании лимфоидной ткани в органных культурах в значительной степени определяется составом питательной среды.
Применение безбелковых сред оказалось иеперсиектнв ным для длительного культивирования (Trowell, 19.55. 1959) В этих экспериментах Trowell выращивание лимфатических узлов (целиком или разрезанных пополам) проводилось на синтетической среде Т8, T9 (без сыворотки). На платформу из металлической сеточки наносили тонкий слой 2% агара или накладывали папиросную бумагу, с тем чтобы предотвратить контакт ткани с металлом.
Гистологическое изучение срезов культур и клеточных суспензий из эксплантатов показало, что через 2 дня на долю пнкнотических форм приходится I -2%, через I дня — 1—3%, а через 7 дней 20% клеток. Пе все культуры пережинают iг/ vitro более 10 дней, многие из них погибают раньше. Вероятно, применение синтетической среды является неблагоприятным фактором для роста лимфатических узлов и недостаточность питания приводит к дегенерации ткани.
Значительно лучшие результаты получаются при культивировании лимфоидных органов на среде, содержащей сыворотку и эмбриональный экстракт (Ball, Auerbach. I960; Pinkel, 1964: Auerbach, 1965: Hannoun, Bnssard, 1966)
В органной культуре на миллипорных фильтрах удалось проследить превращение эпителио-мезенхимного зачатка тимуса 12-дневных мышиных эмбрионов в лимфоидный орган, содержащий большие, средние и малые лимфоциты, а также ретикулярные и эпителиальные стромальные элементы (Auerbach, 1965).
В сходной системе селезенка эмбрионов мыши через неделю культивирования подвергается некротическим изменениям. А при совместной эксплантации селезенки и тимуса пролиферация и дифференцировка лимфоцитов поддерживается до 5 недель.
Поведение лимфоидной ткани в органной культуре в значительной степени зависит от структуры поддерживающего эксплантат субстрата. Так, при использовании платформ, покрытых папиросной бумагой, фрагменты лимфатических узлов и селезенки кролика (Hannoun, Bussard, 1966) сохраняют основные структуры в течение первых дней. Начиная с 4-го дня клеточная плотность в кусочке падает в результате выселения клеток. Этот процесс продолжается до 30—40-го дня культивирования, после чего в эксплантате остается лишь опустошенная строма, иногда с зоной некроза в центре.
Лимфоидные клетки, мигрирующие из кусочков, проваливаются на дно культурального сосуда, когда субстратом для роста ткани служит бумага, представляющая собой широкопетлистую сеть переплетающихся волокон. Наиболее перспективным методом органного культивирования лимфоидной ткани в настоящее время представляются множественные культуры на миллипорных фильтрах. Они обеспечивают не только длительное поддержание пролиферации и дифференцировки лимфоидных клеток, но и протекание in vitro таких сложных процессов, как регенерация с формированием специфических для лимфоидной ткани структур.
5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ
Особенности поведения лимфоцитов
Как видно из сказанного, поведение лимфоидной ткани in vitro во многом определяется методом культивирования. Использование культур в плазменном сгустке обеспечивает
лишь кратковременное переживание лимфоцитов. Уже в первые дни культивирования эксплантат утрачивает морфологию лимфоидной ткани и приобретает соединительнотканный характер. Метод эксплантации в плазменном сгустке предоставляет ограниченные возможности для прижизненного наблюдения культур. Для этой цели более удобно культивировать лимфоциты или фрагменты лимфоидных органов в специальных культуральных камерах, которые дают возможность проводить и микрокиносъемку (Gowans, 1957; Pulvertaft, 1959; Klein, 1958, 1959).
Лимфоциты в камерах in vitro сохраняются недолго — в течение нескольких дней. 80% лимфоцитов из ductus tho-racicus кролика переживают срок 24 часа и только 20%— 48 часов (Gowans, 1957). При использовании камеры Jayne и Pulvertaft, в которой клетки помещают в капле среды на питательный агар и сверху накрывают стеклом, лимфоциты сохранялись до 4 дней (Pulvertaft, 1959). Тесный контакт лимфоцитов в камере с другими клетками обеспечивает более длительное их выживание. Метод суспензионных культур лимфоидных клеток также не обеспечивает их длительного сохранения. По Trowel! (1965), 15% лимфоцитов погибают при получении взвеси, 50 — 70%—в течение 24 часов культивирования и до 90% —через 48 часов.
Однако в монослойных и суспензионных культурах, в присутствии ФГА или антигенов (см. ниже) удается наблюдать существенные изменения. Под действием ФГА и других ми-тогенов происходит бласттрансформация, т. е. образование больших лимфоцитов из малых и пролиферация лимфобластов. Йндуцйрованнаяг <?>Г7ТДйтртре^ёнцировка пбддержива-ется весьма кратковременно (порядка несколько дней). Она связана с важными и закономерными изменениями в синтезе нуклеиновых кислот и белка.
Длительный гистогенез лимфоцитов поддерживается в органных культурах, где он связан со специализированными структурами лимфоидной ткани — вторичными фолликулами, которые сохраняются и даже' вновь образуются в таких условиях. Что касается плазматических клеток, то их гистогенез in vitro протекает с большим трудом даже в органных культурах. Соотношение количества плазматических клеток и лимфоцитов в органных культурах лимфатических узлов значительно ниже, чем в норме. Это, возможно,, связано с тем, что структура мозгового слоя значительно хуже сохраняется и регенерирует in vitro, чем структура коркового слоя лимфатического узла.
