Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка):
7.5. Выделение тонопластной и плазматической мембран с помощью
последовательного центрифугирования в градиентах плотности сахарозы и
глицерола.................................87
7.6. Разделение плазматической мембраны и тонопласта с помощью
электрофореза в свободном потоке..............................89
8. Митохондрии.....................................................89
9. Эндоплазматический ретикулум 91
10. Аппарат Гольджи....................................................93
11. Пластиды...........................................................94
11.1.
Хлоропласты..............................................................
................................94
11.2. Субфракцни хлоропластов .... .... 95
11.3. Этиопласты....................................................96
11.4. Субфракционирование этиопластов .... 97
11.5. Амилопласты...................................................97
11.6. Хромопласты...............................................98
11.7. Пластоглобулы................................................ 99
12. Ядра и ядерные оболочки . . . 99
12.1. Ядерные оболочки.............................................100
12.2. Хроматин и ядрышко . . 100
13. Микротельца.......................................................101
14. Окаймленные везикулы ... . . 102
15. Заключительные замечания ... ... 102
Литература.........................................................103
Глава 3. Иммунологические методы исследования мембран. Элейн
М. Бейлез, Питер Дж. Ричардсон, Дж. Пол Лузио . . . 109
1. Введение...........................................................109
2. Получение поликлональных и моноклональных антител к компонентам
мембран..................................................109
2.1. Достоинства и недостатки поликлональных и моноклональных
антител........................................................109
2.2. Иммунизация животных для получения поликлональных антител
.............................................................111
2.3. Получение моноклональных антител ... .112
2.4. Скрининг моноклональных антител . .... 113
3. Иммуноблоттинг и анализ эпитонов..........................123
4. Иммунологическая очистка субклеточных фракций . . . 127
4.1. Антитела, использующиеся при субклеточном фракционировании
...............................................................128
4.2. Носители для иммуноаффинного субклеточного фракционирования
.............................................................131
420
Оглавление
4.3. Практические вопросы и возможности применения нммуно-
аффцнного выделения клеточных органелл....................132
5. Иммунологическое выделение мембранных компонентов . . .
134
5.1. Солюбилизация мембраных белков............................134
5.2. Очистка мембранных белков на иммуносорбентах . . 137
6. Использование антител для отбора комплементарных ДНК, кодирующих
мембранные белки..........................................141
6.1. Фаговые векторы..........................................142
6.2. Плазмидные векторы 142
6.3. Скрининг....................................................... 143
6.4. Перспективы..............................................145
7. Благодарности.............................................. . 146
Литература.....................................................146
Глава 4. Разделение и анализ липидных компонентов мембран. Джоан
А. Хиггинс..................................................150
1. Введение.......................................................150
2. Экстракция липидов.............................................151
2.1. Растворители и аппаратура.................................151
2.2. Экстракция осадка мембран или небольших объемов концентрированных
суспензий...............................................152
2.3. Подкисление растворителя для липидной экстракции . . 153
2.4. Экстракция больших объемов мембранной суспензии . ' .
153
2.5. Удаление растворителя из липидного экстракта .... 154
3. Разделение липидов по
классам........................................156
3.1. Общие вопросы применения ТСХ....................................157
3.2. Системы растворителей для разделения мембранных липидов 160
3.3. Разделение полифосфоинозитндов и их производных . . 165
3.4. Обнаружение липидов на пластинках для ТСХ .... 169
4. Количественное определение липидов после разделения их с помощью
ТСХ........................................................171
4.1. Элюирование липидов........................................171
4.2. Определение фосфолипидов........................................172
4.3. Определение сложных эфиров......................................174
4.4. Определение холестерола и его эфиров............................175
4.5. Определение свободных жирных кислот ..... 176
5. Исследование трансмембранного распределения липидов . . . 177
5.1. Мембранные препараты............................................178
5.2. Проницаемость микросомной мембраны..............................178
