Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Наличие необычных белков в мембранах клеток GD248, которые были идентифицированы с помощью их биохимических и иммуно-
104
химических свойств, было подтверждено изменением температуры термоиндуцированного перехода белков, регистрируемого по изменению отношения интенсивности сигнала при 2930 см-1 к 2850 см~*. Температура перехода в белках мембран опухолевых клеток была иа И °С ниже, чем в нормальных.
3.3. ИССЛЕДОВАНИЯ МЕМБРАН ПРИ ХИМИОТЕРАПИИ РАКА
3.3.1. Лекарственная устойчивость
Появление лекарственной устойчивости в опухолевых клеточных популяциях и утрата ими в связи с этим избирательного восприятия токсичности противоопухолевых препаратов являются главной проблемой, с которой сталкиваются клиницисты при химиотерапии злокачественных новообразований (Reiser, Capizzi, 1977; Skeel, Lindquist, 1977). Продолжительное лечение больных лекарствами, к которым их опухоли стали устойчивыми, может привести к дальнейшему снижению терапевтического показателя, так как токсичность этих препаратов для нормальных тканей не компенсируется гибелью опухолевых клеток. Таким образом, методы, позволяющие определять начало появления лекарственной устойчивости в течение лечения, окажутся очень полезными для клинициста.
В течение последних нескольких лет стало очевидным, что определенные типы лекарственной устойчивости могут быть выявлены путем обнаружения специфически измененных клеточных поверхностных гликопротеидов (Juliano, Ling, 1976; Juliano et al., 1976; Beck et al., 1979; Riordan, Ling, 1979). Juliano и сотрудники, изучая клетки яичника китайского хомячка, нечувствительных к действию колхицина, показали перекрестную устойчивость клеток к различным структурно не родственным природным продуктам, таким, как винбластин, дауномицин, пуромицин и цитохалазин В. Основой такой устойчивости явилось снижение проницаемости мембран к этим лекарствам. Такой дефект возник вследствие единичной мутации гена, но степень устойчивости может контролироваться множественными аллелями (Juliano, Ling, 1976).
Были выявлены пять клонов, в которых степень устойчивости к колхицину варьировала от 3 до 180 раз. Плазматические мембраны метили метаболически радиоактивным глюкозамином полностью или только их поверхность с помощью галактозоксидазы — В3Н4. Выделяли их из лекарственно чувствительных клеток и сравнивали белковый состав с помощью электрофореза в ДНС-полиакриламидном геле. Гликопротеид с высокой молекулярной массой (165—170 кД) был обнаружен в мембранах лекарственно устойчивых клеток, но отсутствовал в мембранах чувствительных к препаратам клеток. Количество этого белка, именуемого р-гликопротеидом, коррелирует со степенью лекарственной устойчивости в некоторых, но не всех клонах. р-Гликопротеид может составлять не более чем 4 % общего белка плазматической мембраны и действует, как предполагается, путем изменения текучести окружающего его липидного домена
105
в мембране (Juliano, Ling, 1976). Недавно белок был очищен Riordan и Ling (1979),
Изменения высокомолекулярных гликопротеидов обнаружены в актиномицинустойчивых клетках сирийского хомяка, трансформированных SV 40 (Juliano, Ling, 1976), и ввинбластин (ВБЛ)-устойчи-вых лимфобластах CCRF-GEM лейкемии человека (Beck et al., 1979). Йозднее была установлена их перекрестная устойчивость к антра-циклинам, в инкристину и эпифиллатоксину. Механизм лекарственной устойчивости в CCRF-CEM-клетках заключается в снижении поглощения и удерживания клетками лекарства. Лекарственно устойчивые клетки CGRF-CEM были получены путем выращивания их в течение 4—6 недель в присутствии ВЕЛ. В устойчивых клетках изменялась морфология культуры* Они росли большими, рыхло прикрепленными агрегатами, которых было больше, чем единичных клеток, в суспензии, которая более характерна для лекарственно чувствительных культур. Эти наблюдения позволяют предполагать, что свойства поверхности лекарственно устойчивых клеток изменены по сравнению с клетками, чувствительными к препаратам.
В меченных глюкозамином-или галактозоксидазой -В3Н4 гликопротеидах мембран и исследованных в ДСН-полиакриламидном геле очевидный пик радиоактивности был обнаружен в белках с молекулярной массой 170—190 кД лекарственно устойчивых клеток. В чувствительных к препаратам клетках эти белки метились значительно меньше, но в оличие от лекарственно устойчивых клеток пик радиоактивности был обнаружен в области белков с молекулярной массой 75—80 кД. Включение метки в высокомолекулярные белки увеличивается в 269 раз по мере повышения резистентности клеток к ВБЛ, хотя при этом не было обнаружено дополнительных изменений. Ревертанты, полученные при выращивании лекарственно устойчивых в отсутствие винбластина клеток, восстанавливают чувствительность к лекарствам параллельно со снижением интенсивности поглощения ВБЛ и реверсии клеточных поверхностных гликопротеидов, характерных для чувствительных к препаратам клеток.
Более вероятно, что измепспие состава гликопротеидов в клетках CCRF-CEM происходит скорее вследствие увеличения интенсивности гликозилирования, чем за счет повышения содержания белка, так как различия между лекарственно устойчивыми и чувствительными клетками не были обнаружены путем включения 3И-лейципа в белки или окрашивания геля кумасси голубым.
