Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Б. Влияние концентрации IL-1 на включение 3Н-тимидина тимоцитами, оцененное через 72 ч после начала культивирования в отсутствие (светлые кружки) и в присутствии (темные кружки) фитогемагглютинина (1 мкг/мл). ([4]; печатается с разрешения.)
тивирования и приводят к морфологическим изменениям, характеризуемым как бласттрансформация лимфоцитов. Если к таким «активированным» лимфоцитам добавляется IL-1, начинается секреция IL-2, после чего клетки завершают клеточный цикл и делятся. Клетки могут проходить клеточный цикл и в отсутствие IL-1, если к ним добавляют IL-2. Указанный факт говорит о том, что сигналом к митозу служит IL-2, а не IL-1 [32].
Это предположение подтвердили эксперименты, в которых синтез IL-2 был заторможен. Например, митогенное действие IL-1 снижалось под действием глюкокортикоидов — ингибиторов биосинтеза IL-2. Тормозящий эффект при этом зависел от дозы ингибитора [19]. Митогенного действия IL-1 не наблюдалось, если в качестве клеток-мишеней использовались спленоциты молодых бестимусных мышей, не способных к синтезу IL-2 [19].
Механизм взаимодействия IL-1 с Т-клетками пока еще не изучен. Остается неясным, должны ли Т-клетки взаимодействовать с лектином или антигеном для того, чтобы приобрести способность отвечать на IL-1, или IL-1 взаимодействует с необученными, покоящимися Т-клетками. Получены некоторые данные, свидетельствующие о том, что IL-1 взаимодействует со специфическим клеточным рецептором; так, активированные лектином лейкозные Т-лимфоциты способны адсорбировать IL-1 [31]. Однако эти данные следует интерпретировать с осторожностью, поскольку аналогичные эксперименты с нормальными клетками-мишенями окончились неудачей.
21.1.2.2. Биохимическая характеристика
Б связи с тем что недавно были опубликованы обзоры [4, 25], в которых подробно обсуждаются биохимические свойства IL-1 мыши и человека, читателям для получения детальной информации рекомендуется использовать указанные источники. Следует отметить трудность оценки существенной части аналитических биохимических исследований, выполненных до 1980 г., так как количественного анализа активности IL-1 в процессе выделения не проводилось: биологическую активность определяли лишь для одной концентрации каждой полученной фракции (как правило, для разведения 1 : 4). Кроме того, в большинстве случаев биохимической очистке подвергались незначительные количества кондиционированной среды (1—10 л), причем до последнего времени большая часть исследований была осуществлена с супернатантами культур клеток, которые были активны в разведенных от 1 : 5 до 1 : 10. Если биологическая активность IL-1 в количественном отношении подобна активности интерферона, то, по-видимому, концентрация IL-1 в этих супернатантах была очень низка. Действительно, по недавним оценкам 1 ед./мл IL-1 эквивалентна 7• 10_11 М [33]. Поскольку полученная обычным способом кондиционированная среда содержит 10 ед. IL-1 на 1 мл, то в 1 л ее находится 10 мкг IL-1. В результате, если принять во внимание опубликованные данные о выходе IL-1 после очистки (2—4% от исходного препарата), оказывается, что для выделения 1 мг чистого IL-1 потребовалось бы более 1600 л среды.
Недавно мышиный IL-1 был очищен до гомогенного состояния, что стало возможным главным образом благодаря разработке методики усиленного образования IL-1, увеличивающей концентрацию его в среде в 10—20 раз [331. Целесообразно подробно рассмотреть эту работу, поскольку она наглядно демонстрирует, с какими проблемами приходится сталкиваться при очистке лимфокинов.
Источником IL-1 служили клетки мышиной макрофагоподобной клеточной линии P388DX, которые выращивали до образования монослоя в сосудах для культивирования клеток с площадью 30 см2. Методика стимуляции включала четырехчасовую инкубацию с форболмиристатацетатом (10 мкг/мл), цикло-гексимидом (10 мкг/мл) и бутиратом натрия (2мМ), последующую отмывку клеток, инкубацию в течение 1 ч в присутствии актиномицина D (10 мкг/мл) и, наконец, культивирование в течение еще 24 ч в среде RPMI 1640, содержащей 1 % сыворотки плода коровы и 2 мМ бутирата натрия. Описанный метод стимуляции давал от 800 до 1500 ед./мл IL-1 (т. е. титр IL-1 составлял от 1 : 80 до 1 : 150). Из-за добавки в культуральную среду 1% сыворотки плода коровы концентрация белка была весьма высокой (264 мг/л). Как видно из табл. 21.1, 4,78 л такой среды последовательно подвергали осаждению сульфатом аммония, хроматографии на фенилсефарозе и ультрогеле АсА54 и изоэлектрофоку-
Таблица 21.1. Выделение IL-1 ([33]; печатается с разрешения)
Этап выделения Объем, Титр Ед./мл Содержа У дельная Выход, %
ил ние бел активность,
ка, мг ед./мг
Неочищенный супернатант 4790 92 920 1262 3 490 100
Сульфатаммонийный осадок 69 4 347 43 478 431 7000 69
Фенилсефарозе 5 10,800 108 000 49 10 930 12
