Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 69

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 108 >> Следующая

До сих пор неизвестно, каким образом систематические антиоксиданты осуществляют свое биологическое действие на нейроны: взаимодействуют ли они непосредственно с рецепторами нейромедиаторов, в частности с опиоидными рецепторами, или их воздействие на последние опосредовано через липидные компоненты мембраны? На этот вопрос мы попытались получить ответ, исследуя влияние синтетического водорастворимого антиоксиданта из класса экранированных фенолов фенозана-К+ in vitro на процесс комплексообразования специфических лигандов как с мембраносвязанными, таки с солюбилизированными опиоидными рецепторами головного мозга крыс (Хохлов и др., 1986).
Как можно видеть из рис. 8.2, при 3-часовой преинкубации мембранной суспензии с фенозаном-К+ специфическое связывание опиоидного антагониста налоксона с препаратом синаптосом падает практически до нуля в узком интервале концентраций антиоксиданта от 0,5 до 5 ммоль/л. Эти концентрации близки к тем
Рис. 8.2. Вытеснение антиокси-Д.1И I ом фенозаном-К“^ ^Н-даларги-н<1 (10 нмоль/л) из комплекса с
II на шатичсскими мембранами эн-чероцитов тонкого кишечника крысы. v
Инкубация - 60 мин при 25°С; концентрация белка в мембранной фракции - 500 мкг/мл. Среда инкубации содержала (в ммоль/л): 1 рие-НСЦ-буфер - 50,0, pH 7,4;
MgCl 1,0; C’aC'l - 1,0; KCl - 125,0; NavllP04 - 0,5. В состав среды инкубации вносили ингибитор проте-абацитрацин (100 мкг/мл). Каждая точка - среднее из 5 независимых экспериментов
Рис. 8.3. 3 ависимость специфического связывания ^Н-налоксона с препаратом синаптосом головного мозга крыс от времени преинку-бации с антиоксидантом феноза-ном-К+ (1 ммоль/л).
В и Во - количество специфического связанного 3Н-налоксона в присутствии и в отсутствие антиоксиданта. Температура инкубации - 25°С: концентрация белка мембранных препаратов - 500 мкг/мл. Среда инкубации содержала (в ммоль/л): IIEPES - 5,0; pH 7,4; КС1 - 125,0; СаСЬ - 1,0; MgCl2 -1,0; КН2РО4 - 0,5. Каждая точка -среднее из четырех независимых измерений
дозам фенозана-К+, при которых в экспериментах in vivo проявляется его физиологический эффект, опосредованный, как предполагают авторы работы (Архипова и др., 1982), ингибированием свободнорадикальных реакций в липидной фазе биологических мембран. Время преинкубации с фенозаном-К+, равное
3 ч, в данном случае было выбрано не случайно. Из рис. 8.3 видно, что при концентрации фенозана-К+ 1 ммоль/л количество специфически связанного 3Н-налоксона линейно уменьшается с увеличением времени преинкубации препарата мембран с антиоксидантом и через 3 ч составляет лишь 60% от исходного. Более продолжительная преинкубация приводила к утрате спе-
цифичноети в связывании налоксона синаптосомами.
Представленные' данные свидетельствуют, что скорее всего влияние фенольного антиоксиданта на комплексообразование специфического лиганда с мембраносвязанными опиоидными рецепторами обусловлено их взаимодействием не с центром связывания, экспонированным в водную фазу, а с погруженной в мембрану гидрофобной частью рецептора. Лля подтверждения этого предположения нами исследовалось влияние фенозана-К+ на специфическое связывание 3Н-налоксона с препаратом солюбилизированных опиоидных рецепторов головного мозга крыс. Было обнаружено, что действие антиоксиданта на активность солюбилизированных рецепторов проявляется гораздо раньше, чем в случае мембраносвязанных рецепторов: для этого было достаточно часовой инкубации антиоксиданта и радиоактивного лиганда с препаратом рецепторов и не требовалась преинкубация последнего с антиоксидантом. В данном случае интервал действующих доз фенозана-К+ значительно расширялся в сторону более низких значений концентраций, вплоть до 10 мкмоль/л (см. рис. 8.2).
Итак, при облегчении доступа синтетического фенольного водорастворимого антиоксиданта к гидрофобной области рецептора возрастала эффективность действия антиоксиданта на процесс специфического комплексообразования опиоидного лиганда с рецепторными центрами связывания. Следовательно, действие данного синтетического ингибитора свободнорадикальных процессов опосредовано его взаимодействием с внутримембранной частью опиоидного рецептора. Однако остается пока невыясненным: с каким компонентом этого рецептора - белковым или липидным -взаимодействует фенозан-К+?
Мы склоняемся к предположению, что в данном взаимодействии главную роль играет липидная составляющая опиоидного рецепторного комплекса или по крайней мере окружающие этот комплекс так называемые "‘ампулярные” липиды. Это предположение подтверждается и литературными данными (Pfeiffer, 1984), г.оюрые показывают, что обработка комплексов, полученных при '(.мобилизации опиоидных рецепторов головного мозга овцы с помощью двух различных детергентов - CHAPS и дигитонина фосфолипазой Ат. приводила к ингибированию связывания опи-. .он. Кроме того, при такой обработке уменьшаются размеры солюбилизированных комплексов. Представленные данные трактуются следующим образом: фосфолипиды, связанные с белковой частью рецептора, входят в состав рецепторного опиоидного комплекса, а уменьшение размеров последнего и утрата им связывающей способности при действии фосфолипазы Аз могут отражать либо конформационные изменения рецепторного комплекса, либо диссоциацию на меньшие субъединицы.
Предыдущая << 1 .. 63 64 65 66 67 68 < 69 > 70 71 72 73 74 75 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed