Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 54

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 108 >> Следующая

нМ имоль/мг нМ пмоль/мг нМ пмоль/мг
белка белка белка
Налоксон 0 0,3 0,007 6,1 0,41 - -
18 0,3 0,007 6,2 0,42 - -
52 - - 7,1 0,36 -
144 - - 8,1 0,3
Морфин 0 0,55 0,007 12 0,12 90 0,12
18 0,52 0,007 11 0,10 70 0,10
40 0,58 0,005 24 0,12 8Г> 0 11
88 - - - 50 0.1"
D-Ala*, 0 0,40 0,005 6,5 0,12 40 0,1 ^
D-Leu5- *18 0,42 0,005 6,0 0,1 45 0 12
энкефалин 40 * 0,40 0,003 6,2 0,1 25 0,06
1 88 - - - 7.4 о о:;
Результаты исследования стабильности опиоидных рецепторов при 0°С приведены в табл. 5.3. Из представленных в табл. 5.3 данных видно, что некоторые изменения параметров связывания морфина и D-Ala2, Ю-Ьеи5-энкефалина с опиоидными рецепторами наблюдаются уже при времени инкубации мембранных препаратов, превышающем одни сутки. По прошествии 2-7 сут опиоидные рецепторы значительно инактивируются. К сожалению, для проведения большинства серийных биохимических экспериментов такого времени бывает часто недостаточно. В связи с этим для получения стандартных, стабильных мембранных препаратов опиоидных рецепторов было изучено влияние на их свойства традиционных методов стабилизации, в частности хранения в присутствии дитиотреитола (SH-реагента) и в замороженном состоянии. Исследование влияния 5 мМ дитиотреитола на свойства опиоидных рецепторов позволило установить, что этот реагент не оказывает на них стабилизирующего действия: в присутствии дитиотреитола при 4°С опиоидные рецепторы почти полностью инактивируются в течение 5-6 дней. Использование для стабилизации мембранных препаратов рецепторов методов замораживания показало, что замороженные мембранные препараты относительно быстро теряют способность к специфическому связыванию опиатных лигандов (табл. 5.4, 5.5).
Таблица 5.4
Влияние .условий замораживания па специфическое связывание опиатных лигандов с мембранными препаратами после хранения мембран в течение 3 дпе-й при температуре —55° С (за 100% принято связывание се с невыделенных мембран)
.Г-----". „„ , г. Концен Специфическое связывание, %
Лиганд трация медленное за быстрое замо быстрое замо
лиганда., мораживание в раживание в раживание в
нМ среде инкуба среде инкуба 0,32 мМ раст
ции А (3 ч) ции А воре сахарозы
~Морфин 0,15 100 70 52
13,8 98 92 87
Налохсок 0,07 84 76 82
9,1 89 82 73
D-Ala‘2, 0,24 92 63 11
D-Leu5- ¦
еикефалии 21,1 69 68 86
С целью получения стабильных мембранных препаратов рецепторов было изучено влияние лиофилизации на свойства и стабильность опиоидных рецепторов мембранных препаратов головного мозга (Зайцев с соавт., 1983; Сергеева с соавт., 1986). Был найден режим получения лиофилизованных мембранных препаратов с параметрами комплексообразования лигандов с опиоидными рецепторами, идентичными таковым у свежевыделенных мембр ,нных препаратов (Варфоломеев, Зайцев
Таблица 5v5 Стабильность опиоидпых рецепторов мембранных препаратов при низких температурах (уровень связывания, % от исходной величины)
Лиганд Срок Условия хранения
хранения
(месяцы) -13° С -35° С
Налоксон 1 40 -
Морфин 4 0 18
D-Ala2, 4 4 23
D-Leu5-
енкефалин
Мевх, 1985; Сергеева с соавт., 1986).
Следует заметить, что препараты лиофилизованных мембран дают “натриевый сдвиг”, т.е. при добавлении в среду анализа ионов натрия сродство /i-агониста морфина к опиоидным рецепторам лиофилизованных мембран резко ухудшается, в то время как сродство антагониста налоксона даже несколько улучшается. При этом величина “натриевого сдвига” у лиофилизованных мембран такая же, как у свежевыделенных препаратов. Это позволяет использовать лиофилизованные мембраны для определения агонист-антагонистической природы опиатных лигандов.
Экспериментальные результаты по влиянию лиофилизации на стабильность мембранных препаратов опиоидных рецепторов приведены в табл. 5.6. Из сравнения данных, представленных в табл. 5.5 и 5.6, видно, что опиоидные рецепторы лиофилизованных мембран существенно более стабильны в сравнении с препаратами сырых мембран. Отметим при этом:
Предыдущая << 1 .. 48 49 50 51 52 53 < 54 > 55 56 57 58 59 60 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed