Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 16

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 108 >> Следующая

1в„]
TLJ
ом
щ
WI
Рис. 2.10. Зависимость t(l) в координатах Скэтчарда имеет ярко выраженный нелинейный характер, указывающий на гетерогенность рецепторной системы. Точки с отрицательными значениями t не имеют физического смысла (явные выбросы) и не учитываются при визуальном анализ<
окончательный вывод о гетерогенности рецепторной системы можно делать только в том случае, если найдены не одна, а несколько таких стартовых точек в некоторой области значений [Lcx]^Kh-Разностный метод позволил нам исключить константу неспецифического связывания из числа параметров модели (2.14). Это дает возможность отказаться от измерения неспецифического связывания, за счет чего появляется резерв повышения точности экспериментов по общему связыванию. Начальные приближения для параметров специфического связывания могут быть получе-
Рассмотрим конкурентное вытеснение меченого лиганда немеченым в системе независимых рецепторов. Этот процесс описывается следующей схемой:
где звездочкой отмечены характеристики связывания меченого лиганда в отличие от немеченого.
А. Вначале остановимся на случае, когда ;/еченый и немеченый лиганды имеют одну и ту же химическую структуру, т.е. К* —К;. Тогда выражение (2.20) можно записать в виде
Будем оперировать величинами [Bcx*]/[L*j и [Bj*]/[L*], где [Bj*]
- концентрация связанного с рецептором меченого лиганда при j-й концентрации немеченого лиганда, [Всх*] - концентрация связанного с рецептором меченого лиганда в стартовой точке (стартовой может быть точка, в которой концентрация немеченого лиганда равна нулю). Указанные величины есть не что иное, как тангенсы углов наклона прямых, соединяющих начало координат с точками на изотермах связывания меченого лиганда с рецепторной системой, отвечающими заданной концентрации [L*j
ны из анализа графической зависимости координатах Скэтчарда.
Анализ кривых конкурентного вытеснения
(2.19)
которой соответствует уравнение
п
(2.20)
п
меченого лиганда в присутствии различных концентраций немеченого лиганда [L] (рис. 2.11). Разность величин [BCT*]/[L*] и [Bj*]/[L*] равна
?
[в;т]
[L-]
[Ri]o
[В*]
[L-]
Е
1=1
П
Е
[Rile
^K1+tL*] + [LCI]
___iBik,___т . А ГГ I
Ki+[L«)-f[LCT7
^ Ki + [L*] + [Lj] ^ (K> + [L*][LCT]) + A[Lj] ’
(2.22)
где A[Lj]—[Lj]-[LCT].
Нетрудно видеть, что полученное выражение аналогично уравнению (2.14) и также дает возможность выделить процессы взаимодействия лигандов с высокоаффинными рецепторами. Для визуализации данных в этом случае удобно использовать координаты
к,
[В?
[ь*:

[b;,1/[l'] - [b;]/[l*]
М
Б. Разностный подход можно использовать и в самом общем случае, когда аффинности меченого и немеченого лигандов не совпадают: К;^К;. Тогда
Рис. 2.11. Кривые комплексообразования меченого лиганда, с центрами связывания в присутствии концентраций немеченого лиганда [LJct (а) и [L]j

[ву [в-:
= Е
[RJc

[Я,
[И [L*l tr К- + ?[LCT] + [L-] ^К> + |-[Ц + [Ь
Т.7Г
К* + t7^"[LCt]+[L*]
дм
1=1
Kj + + [LCT]^ 4- A[Lj]
(2.23)
В. Наилучшее проявление высокоаффинных центров наблюдается при значениях концентраций меченою лиганда L*
значительно меньших величины К;*, поскольку именно в этом случае относительный вклад высокоаффинного связывания, определяемый соотношением величин (Kj+[LCT]+[L*]) (2.22) или
торов, будет максимальным. В условиях [L*]<CK* отношения [Вст*]/[Ь*] и [Bj*]/[L*] равны соответственно
и представляют собой тангенсы углов наклона линейных участков изотерм связывания лиганда L* при различных концентрациях немеченого лиганда L. Эти величины можно довольно точно определить, измерив концентрации связанного с рецепторами лиганда при нескольких его концентрациях в растворе, удовлетворяющих условию [Ь*]<СК;*.
Разность величин Тст и Tj равна
Полученное выражение по структуре аналогично всем уравнениям (2.14), (2.22), (2.23) разностного метода и может быть использовано для отдельного анализа высокоаффинных рецепторов меченого лиганда.
Следует отметить, что выражения (2.22) - (2.24) позволяют оценить концентрацию высокоаффинного рецептора не только методами нелинейной регрессии, но и используя простые графические анаморфозы типа Скэтчарда, Лайнуивера-Берка, Иди-Хофсти и т.д., что в определенных ситуациях может быть весьма полезным.
Для обработки экспериментальных данных по лиганд-ре-цепторному связыванию была создана программа для ЭВМ
В программе предусмотрены следующие возможности: графическое представление экспериментальных данных по общему связыванию в различных координатах (в прямых координатах (L, В), полулогарифмических (IgL, В), в координатах Скэтчарда (В, В/L)). Для данных по неспецифическому связыванию проводится линейная регрессия и оценивается значение Кнс*. Затем
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed