Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
К сожалению, при исследовании рецепторных систем (и особенно I иоидных рецепторов - Chang K.-U., 1984; Kosterlitz, 1985; Варфоломеев, Зайцев, Мевх, 1985) редко встречаются случаи комплексообразования лиганда только с одним рецептором. Наличие в мембранных препаратах других типов рецепторов данного класса, к которым исследуемый лиганд имеет хотя и меньшее, но все же заметное сродство, приводит к тому, что экспериментально аблюдаемая зависимость общей концентрации связанного лига да [В] от концентрации свободного лиганда в условиях равновесия имеет вид
М = ±Ы = ±Щгу Р-3>
i=l i=l 1 И
следствием чего является резкое возрастание трудностей определения п раметров системы Kj и [Ri]0.
'Таким образом, проблемы, которые возникают на первом этапе при физико-химическом исследовании системы рецепторов, условно .V >жно подразделить на три группы: 1) доказательство от-с у т с ТВ! ( кооперативных взаимодействий в системе рецепторов, г.v. установление toi о факта, что в условиях равновесия процесс комплексообразования протекает в соответствии с уравнением (2.8); 2) выяснение числа типов рецепторов (п), с которыми в: аимодействует лиганд; 3) определение равновесных и кинетических параметров комплексообразования лигандов с рецепторами.
Для решения поставленных задач традиционно используются графические представления. В частности, критерием того, что лиганд связывается только с одним типом центров, является линейная зависимость экспериментальных данных в условиях равновесия (Scatchard, 1949; Schibarz, 1976) в координатах Скэтчарда ([В], [В]/[L]), JIайнуивера-Берка (1 /[L], 1 /[В]) (Полторак, Чухрай.
1971; Березин, Клесов, 1976). Хилла (lg [L], lg i-B[B]/(R]o) (НШ-
1910), Иди-Хофсти ([B]/[L], [В]) (Eadie, 1952; Hoftec, 1952), Вульфа ([L], [L]'[B]) (Cressie, 1981).
Отклонение от прямой свидетельствует о том, что процесс комплексообразования соответствует модели с двумя или более независимыми типами центров связывания. В координатах Клот-ца (lg L, В) (Klotz, 1982) дискриминация моделей основывается на анализе количества полуволн. Достаточно разработаны приемы и методы графического определения параметров в соответствии с идентифицированными моделями (Schwarz, 1976; Cressie, 1981; Варфоломеев, Зайцев, 1982; Варфоломеев, Зайцев. Мевх, 1985; Зайцев, Курочкин, Варфоломеев, 1987). Среди указанных ! рафических представлений при идентификации моделей комплексообразования наиболее предпочтительны координаты Скэтчар-
ft*
If'
[в]
U3
LkL
С L]
Рис. 2.1. Распределение ошибок в разчичньйк графических пред'таи пени ях данных по связыванию
да и Иди-Хофсти, так как они наиболее чувствительны к л)<'гчл.\; отклонениям от линейности.
Несмотря на простоту и доступность графических предел авле-ний. практическое их применение во многих случаях осложнено поскольку наибольшая в используемых при анализ' кеердшм т а х ошибка, наблюдаемся именно в тех областях, моторы* им--и • • : •*> нейшее .шачение для выявления типа модели и гочлого .-к:» ‘Деления ее параметров (рис ‘J.1). В настоящее время л - ёъеь . тивиоео выбора модели ко мп л ек< • о о б р а л ева ни я и бо к- w . ¦ е;.’ t
опрел ел они.-; ньр".м-е:гров все чаще обращаются к мес., ;чм м. . ’’ч'Гг ¦ ¦ леи ‘-’е^оолее распр.,- -paM'w •, .j?-. .¦ :
барда, основанный на применении F-критерия Фишера (Mursoh, Rodbard, 1980).
Суть подхода заключается в следующем: с использованием формулы (2.3) методом наименьших квадратов (МНК) в прямой системе измерений определяются параметры Ki и [Rijo, а также среднеквадратичные отклонения Si и S2 для более простой и более сложной моделей соответственно. Далее вычисляется отношение
F _ (si — s2)/(mi — m2) ^ ^
S2/m2
где mi и m2 - степени свободы для простой и более сложной моделей соответственно. Вычисленное по формуле (2.4) F-отношение в дальнейшем сравнивают с табличными значениями F-критерия для (гщ-тг) и m2 степеней свободы, на основании чего и производится дискриминация моделей. Однако использование F-критерия для модели комплексообра-зования едва ли корректно в связи с зависимостью ВеЛИЧИН Si И S2, являющихся функциями от одного и того же набора случайных данных, тем более что реальный объем эксперимента, как правило, невелик и асимптоматические формулы, приводящие к F-критерию, мало пригодны. В этой связи встает проблема поисков подходов, позволяющих более надежно определить количество центров, с которыми связывается лиганд, и найти параметры, описывающие процессы комплексообразования. Для решения данной проблемы нами разработан новый подход - метод анализа комплексообразования лигандов с центрами связывания на основе имитационного моделирования (МИМ) (Курочкин с соавт., ,1984а; Зайцев, Курочкин, Варфоломеев, 1987).
