Инфекционные болезни национальное руководство - Венгеров Ю.Я.
ISBN 978-5-9704-1000-4
Скачать (прямая ссылка):
А
АГ 1 АТ 1 АТ 2 %%
А**А А + -/Ху А А А + А А А
Свечение комплекса «антиген-антитело» при микроскопии в ультрафиолетовом спектре
АГ 2 АТ 3 АТ 4
Д
ф ^ Свечение комплекса «антиген -антитело» при микроскопии в ультрафиолетовом спектре
Рис. 5-17. Схема проведения непрямой реакции иммунофлюоресценции: АГ 1 — антигенсодержащий клинический материал; АГ 2 — стандартный антиген; АТ 1 — антитела стандартной иммунной сыворотки кролика; АТ 2 — антивидовые антитела к иммуноглобулинам сыворотки крови кролика; АТ 3 — антитела сыворотки крови больного; АТ 4 — антитела антивидовой сыворотки к иммуноглобулинам человека; Ф — флюорохром.
Иммуиоферментиый аиализ
ИФА применяют для выявления антигена в материале от больного или антител в сыворотке крови с определением их принадлежности к иммуноглобулинам различных классов.
ИФА включает два этапа:
? взаимодействие антител с антигеном:
? ферментативную индикацию образовавшегося комплекса «антиген-антитело» за счёт введения меченных ферментом антител.
Меченые антитела связываются с комплексом «антиген-антитело», после добавления субстрата-хромогена за счёт фермент-субстратного взаимодействия реакционная смесь приобретает окраску, которую регистрируют визуально или спектрофотометрически.
ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ 81
Существуют два варианта ИФА: гетерогенный (твердофазный) и гомогенный (жидкофазный). Гомогенный ИФА осуществляют в однофазной системе — в растворе. Твердофазный ИФА основан на феномене иммуносорбции — иммобилизации антител или антигенов на нерастворимых носителях (поверхность лунки полистиролового планшета или полистироловых шариков).
В практической деятельности предпочтение отдано твердофазному варианту. Твердофазный ИФА может быть проведён в варианте определения антигена или антител неконкурентным (прямым) или конкурентным методом.
Неконкурентный ИФА имеет две модификации: сэндвич-метод и антигло-булиновый ИФА (рис. 5-18). Антиглобулиновый ИФА позволяет определить в сыворотке крови антитела с учётом их изотипа, что даёт возможность установить период инфекционного процесса.
Принцип конкурентного ИФА в том, что искомые антитела или антиген кон-курируют с конъюгатом таким образом, что их минимальные концентрации вытесняют конъюгат и связываются с адсорбированными на твёрдой фазе комплементарными антигеном или антителами соответственно (см. рис. 5-18). При определении антигенов возбудителя рекомендовано проведение ИФА в двух вариантах: использование неконкурентного метода на первом этапе и конкурентного как подтверждающего специфичность реакции — на втором (например, использование подтверждающей ИФА тест-системы при выявлении HBsAg).
По сравнению с ранее описанными методами ИФА обладает существенными преимуществами:
? высокой чувствительностью, позволяющей выявлять до 0,05 нг/мл антигенного материала:
? высокой специфичностью за счёт использования моноклональных антител, взаимодействующих со строго определёнными эпитопами анализируемых антигенов:
о возможностью использования минимального объёма исследуемого материала (1-2 мкл);
? автоматизацией всех этапов проведения исследования.
В настоящее время ИФА широко применяют для диагностики инфекционных болезней бактериальной, грибковой этиологии, протозойных инфекций и гельминтозов. Наиболее важное значение метод имеет в диагностике вирусных инфекций — ВГВ, вирусного гепатита С (ВГС) и вирусного гепатита D (ВГО), ВИЧ-инфекции, герпесвирусной, ротавирусной, аденовирусной инфекции и др. В диагностике ВИЧ-инфекции ИФА играет роль скринингового исследования для выявления суммарных антител к антигенам ВИЧ; положительный результат требует подтверждения методом иммунного блоттинга.
Скрининг — массовое обследование лиц, не считающих себя больными, — проводят для выявления скрытопротекающих заболеваний. Скрининговые исследования обычно выполняют с использованием недорогих иммунологических тестов, результаты которых оценивают, используя параметры достоверности. Критерии достоверности скринингового теста — его чувствительность и специфичность, рассчитываемые с помощью четырёхпольной таблицы сопряжения (табл. 5-4).
Характеристика скринингового теста:
? чувствительность — вероятность положительного результата у лиц с данной патологией равна [а/(а + с)] х100%;
? специфичность — вероятность отрицательного результата у лиц без патологии равна [d/(b + d)] х100%;
? положительное прогностическое значение — вероятность наличия патологии при положительном результате теста равна [а/(а + Ь)] х100%;
? отрицательное прогностическое значение — вероятность отсутствия патологии при отрицательном результате теста равна [d/(c + d)] х100%.
Антитела ( ^ ) иммобилизированы иа твёрдой фазе — иа дие лунки полистиролового планшета
