Инфекционные болезни национальное руководство - Венгеров Ю.Я.
ISBN 978-5-9704-1000-4
Скачать (прямая ссылка):
Метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлони проводят в тонком слое агарового геля на стеклянной пластине. В лунки раздельно вносят антигены и иммунные сыворотки. Диффундируя в геле, гомологичные антигены и антитела формируют линию преципитации в месте их встречи в эквивалентных соотношениях (рис. 5-11).
Рис. 5-11. Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони: 1 — центральная лунка, в которую внесена антисыворотка к определяемому антигену; 2 — периферические лунки, в которые внесён биологический субстрат, содержащий антиген; 3 — линия преципитации.
76 МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
Радиальная иммунодиффузия по Манчини. Метод применяют для определения классов иммуноглобулинов, а также в диагностике гриппа путём выявления противогриппозных IgM. На стеклянную пластину наносят тонким слоем расплавленный гель с добавленной антиглобулиновой сывороткой к иммуноглобулинам различных классов, а в лунки вносят исследуемую сыворотку крови пациента. Диаметр выявляемой зоны преципитации пропорционален концентрации иммуноглобулинов (рис. 5-12).
1
Рис. 5-12. Реакция радиальной иммунодиффузии. 1 — зона преципитации. В центр лунки с агаровым гелем, содержащим антиглобулиновую сыворотку к IgM человека, внесён биологический субстрат с определяемым антигеном; диаметр образовавшейся зоны преципитации пропорционален концентрации антигена.
Иммуноэлектрофорез — метод электрофоретического разделения антигенов (антител) в геле с последующим их выявлением посредством преципитации соответствующими антителами (антигенами). Встречный иммуноэлектрофорез — экспресс-метод диагностики гнойных бактериальных менингитов путём выявления полисахаридных антигенов основных возбудителей (Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа V). Метод основан на способности антител, имеющих слабоположительный заряд, и отрицательно заряженных полисахаридных антигенов перемещаться навстречу друг другу в электрическом поле. Появление линии преципитации свидетельствует о наличии гомологичных антител в диагностической сыворотке крови и антигенов в СМЖ (рис. 5-13).
Иммуноэлектрофорез позволяет получать разнообразную информацию об отдельных компонентах сложной смеси антигенов без предварительного их выделения в чистом виде. Метод электрофоретического разделения антигенов в агаровом геле, основанный на различной, в зависимости от молекулярной массы, электрофоретической подвижности молекул, используют для разделения антигенов ВИЧ при подготовке к иммунному блоттингу, для определения антител к отдельным антигенам вируса в сыворотке крови инфицированных.
1 2
Рис. 5-13. Реакция встречного иммуноэлектрофореза: 1 — вертикальный ряд лунок, в которые внесён биологический субстрат (в данном примере — цереброспинальная жидкость); 2 — вертикальный ряд лунок, в которые внесена антисыворотка к определяемому антигену (в данном примере — антисыворотка к полисахариду менингококка серогруппы А); 3-10 — номера образцов биологического субстрата (реакция положительная); 11 — линия преципитации.
ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ 77
Реакция связывания комплемента
РСК основана на феномене гемолиза с участием комплемента, т.е. способна выявлять только комплементсвязывающие антитела.
РСК — сложная серологическая реакция, в которой участвуют две системы: исследуемая, представленная комплексом «антиген-антитело» и комплементом, и гемолитическая (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка). Гемолитическая сыворотка — инактивированная прогреванием сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана. Она содержит антитела против эритроцитов барана.
Результат РСК положителен (отсутствие гемолиза) при содержании в исследуемой сыворотке гомологичных антигену антител. Образовавшийся иммунный комплекс связывает комплемент, а при его отсутствии добавление гемолитической системы не сопровождается гемолизом. Если в сыворотке нет антител, соответствующих антигену, образование комплекса «антиген-антитело» не происходит, комплемент остаётся свободным и вызывает гемолиз эритроцитов, т.е. наличие гемолиза — отрицательный результат реакции (рис. 5-14).
Рис. 5-14. Схема проведения реакции связывания комплемента: АГ — антиген; С — комплемент; Э — эритроциты барана, сенсибилизированные антивидовыми антителами (гемолитическая система). А — при добавлении в первую пробирку сыворотки, содержащей антитела, происходит образование комплекса «антиген-антитело», к которому присоединяется комплемент; внесение гемолитической системы не вызывает гемолиза, так как комплемент связан, — реакция положительная. Б — добавление в первую пробирку серонегативной сыворотки не приводит к образованию комплекса «антиген-антитело», комплемент остаётся свободным, при внесении гемолитической системы развивается гемолиз — реакция отрицательная.
Реакция иейтрализации
PH основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать инфекционное действие вируса или токсина. С помощью PH выявляют противовирусные антитела в сыворотке крови больного, определяют тип токсина при диагностике ботулизма. В ходе постановки PH смесь антигена и антител вводят в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы) или лабораторному животному (рис. 5-15).
