Инфекционные болезни национальное руководство - Венгеров Ю.Я.
ISBN 978-5-9704-1000-4
Скачать (прямая ссылка):
В целях повышения достоверности результатов лабораторного исследования, особенно в случаях скрытопротекающего заболевания, используют двухэтапное тестирование клинического материала. На первом этапе (скрининговое исследование) применяют высокочувствительный тест (показатель чувствительности не менее 99,9%). На втором этапе (подтверждающее исследование) проводят тест, характеризуемый высокой специфичностью, исключающий возможные ложноположительные результаты скринингового теста. Двухэтапный алгоритм диагностики применяют при ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитах.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
Серологические реакции обозначают в соответствии с феноменами, сопровождающими образование комплекса «антиген-антитело» при взаимодействии различных по свойствам компонентов. Различают реакции агглютинации, преципитации и лизиса.
Реакции агглютинации
Реакции агглютинации (РА) основаны на применении корпускулярного антигена (бактерии, сенсибилизированные эритроциты, сенсибилизированные частицы латекса и др.), взаимодействующего со специфическими антителами/антигенами; в результате образующийся иммунный комплекс выпадает в виде осадка.
Реакция агглютинации
Принцип метода заключён в добавлении стандартной взвеси бактерий (живой культуры или инактивированной) к серийным разведениям испытуемой сыворотки в пробирках или лунках планшета (рис. 5-3).
РА со специфической иммунной сывороткой на предметном стекле используют для идентификации выделенных микроорганизмов (рис. 5-4).
ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ 71
Рабочее разведение Титрование
исследуемой исследуемой
сыворотки сыворотки
0,5 мл 0,5 мл 0,5 мл 0,5 мл 0,5 мл
Буферный раствор
Внесение стандартной взвеси чистой культуры возбудителя (живой или инактивированной), инкубация, учёт результатов и контроля
ш
¦¦'.'і1,'
1:20 1:40 1:80 1:160 1:320
Титр антител Контроль
сыворотки и антигена
Рис. 5-3. Схема проведения развёрнутой реакции агглютинации (определение титра антител в сыворотке крови).
АТ
+
А0О
8о0о-
ВБ
Агглютинат
Рис. 5-4. Схема проведения ориентировочной реакции агглютинации на стекле (идентификация чистой культуры возбудителя, выделенной из клинического материала). Условные обозначения: 1 — капля стандартной агглютинирующей сыворотки крови; 2 — внесение взвеси чистой культуры;
3 — образование агглютината; АТ — агглютинирующие антитела; ВБ — взвесь бактерий.
72 МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
РА применяют для диагностики бруцеллёза (реакции Райта, Хеддльсона), туляремии, лептоспироза [реакция агглютинации и лизиса (PAJI) лептоспир], листе-риоза, шигеллёза, иерсиниоза, псевдотуберкулёза и др. Это наиболее исторически ранний метод серологической диагностики, имеющий сравнительно невысокую чувствительность и специфичность и вытесняемый более современными методами.
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации
Для постановки реакции непрямой гемагглютинации [(РНГА) или реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)] используют эритроциты животных (барана, обезьяны, морской свинки, некоторых птиц), сенсибилизированные антителами или антигеном методом инкубации взвеси эритроцитов и раствора антигена или иммунной сыворотки (у-глобулиновой фракции).
Диагностикумы, полученные на основе сенсибилизированных антигенами эритроцитов, называют антигенными эритроцитарными диагностикумами, например: эритроцитарные шигеллёзные диагностикумы, эритроцитарные сальмонеллёзные О-диагностикумы, эритроцитарные псевдотуберкулёзные, иерсиниозные, дифтерийные и др. Они предназначены для определения антител в серийных разведениях сывороток крови (рис. 5-5).
А
АТ
Эритроцитарный
антигенный
диагностикум
Ашпотинат
Схема учёта результатов РПГА
~Y
Агглютинация
Отсутствие агглютинации
Рис. 5-5. Схема проведения реакции пассивной гемагглютинации для выявления антитоксических противодифтерийных антител. Условные обозначения: Э — сенсибилизированные эритроциты барана; АГ — антиген (дифтерийный анатоксин); АТ — антитоксические противодифтерийные антитела.
Диагностикумы на основе эритроцитов, сенсибилизированных специфическими иммуноглобулинами, называют антительными (иммуноглобулиновыми) диагностикумами. Они предназначены для выявления антигенов в различном материале. Например, эритроцитарный иммуноглобулиновый дифтерийный диагностикум для РНГА, применяемый для выявления экзотоксина коринебактерий в жидкой питательной среде при посеве в неё материала из носа и ротоглотки (рис. 5-6).
Реакцию гемагглютинации применяют в практике для диагностики как бактериальных (брюшной тиф, паратифы, дизентерия, бруцеллёз, чума, холера и др.), так и вирусных (грипп, аденовирусные инфекции, корь и др.) болезней. Это метод экспресс-диагностики. По чувствительности и специфичности РНГА на порядок превосходит РА.
