Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Мардланды С.Г. -> "Герпетическая инфекция" -> 11

Герпетическая инфекция - Мардланды С.Г.

Мардланды С.Г. Герпетическая инфекция — Электрогорск, 2007. — 50 c.
ISBN 5-8311-0201-7
Скачать (прямая ссылка): gerpeticheskayainfekciya2007.djvu
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 20 >> Следующая

В основу всех этих тест-систем положен метод непрямого ИФА, когда на поверхности лупок полистирольного планшета сорбируется специфический лизатный антиген, а наличие специфических антител в исследуемом образце после их связывания с антигеном определяется с помощью антительного конъюгата по реакции хромогена, добавляемого в лунки на заключительной стадии постановки.
Очевидно, что одним из важнейших элементов в разработке таких тест-систем является получение иммуносорбента, т.е. сорбция специфического антигена на поверхности лунок полистиро-лового планшета.
Здесь крайне важны характеристики сорбируемого антигена, качество используемого планшета и сама технология сорбции.
Для приготовления иммуносорбентов в указанных тест-системах были использованы высокоочищенные натуральные антигены ВПГ-1 и ВПГ-2 штаммов MS и G(ATCC), полученные на фирме Viro-Immun из разрушенных ультразвуком культур клеток почки обезьяны.
Для сорбции антигенов были использованы разборные планшеты Maxi-sorb фирмы Nunk (Дания), несомненным достоинством которых помимо характеристик, обычных для высококачественных планшетов для ИФА, является возможность использования в постановке любого числа лунок стрипа, т.к. его устройство позволяет отламывать необходимое для работы число лунок.
Сама технология приготовления иммуносорбента включает шесть этапов - сорбция антигена, отмывка, лиофильная сушка в атмосфере азота, инкубация с блокирующим раствором, повтор-
25
ная лиофильная сушка в атмосфере азота и запайка планшетов в вакуумных пакетах.
Как показали последующие испытания тест-систем, именно такая многоэтапная технология получения иммуносорбента гарантирует его качество и стабильность в течение не менее 1 года.
Важным моментом конструирования тест-систем является выбор системы контрольных образцов. В указанных тест-системах использованы три контрольных образца - К+, К- и Кгюр
Они выполняют не только функции контроля правильности постановки ИФА, для чего, в принципе, хватило бы К+ и К-. Третий контрольный образец, Кпор, т.е. образец с содержанием антител, которое можно считать «порогом», разделяющим исследуемые образцы на «положительные» (содержащие антитела в диагностическом титре) и на «отрицательные» (не содержащие антитела или содержащие антитела в титре, ниже диагностического), позволяет обходиться без расчетов так называемых «пороговых» значений оптической плотности (ОПГЮр) при учете результатов анализа и непосредственно использовать как ОПпор значение ОП в лунках с этим контрольным образцом.
Кроме того, в наборах «ЭКОлаб-ВПГ-1-IgG” и “ЭКОлаб-ВПГ-2-IgG” К+ и К1Юр используются для определения титра антител, без дополнительных постановок ИФА с титрованием исследуемых образцов. Эго стало возможным за счет включения в наборы К+ и Кпор с предварительно определенными титрами антител. Получив значения ОП в лунках с этими образцами и зная титры антител в них, можно построить калибровочный график, определяя уже по нему титры антител в исследуемых образцах. Так что К+ и К1юр выполняют в указанных тест-системах еще и функции калибраторов.
В качестве конъюгата во всех тест-системах использованы антитела диагностические мышиные против иммуноглобулинов человека классов IgG и IgM, соответственно, меченные пероксидазой.
Помимо этих специфических компонентов тест-системы для определения антител класса IgG включают: раствор индикаторный (стабилизированный раствор хромогена - тетраметилбензидина) и обычные для большинства ИФТС вспомогательные растворы
- концентрат отмывающего раствора, содержащий детергент, буферный раствор для разведения сывороток и стоп-реагент (кислота серная, 1 моль/л раствор).
26
В набор тест-системы для выявления антител класса IgM, кроме того, входит блокирующий раствор, который вводится в исследуемые образцы для устранения интерференции IgG-антител, ревматоидного фактора и антинуклеазных антител (см. рис. 1), которая может сказаться на результатах ИФА.
Антиген иммуносорбента Г Специфическое IgG-антитело
I Ревматоидный фактор
Антиген иммуносорбента / Специфическое IgG-антитело
Специфическое IgM-антитело ^ ^Хромоген Конъюгат анти-IgM
Избыток IgG - занижение сигнала
/ Конъюгат анти-IgM Хромоген
y:Z38^
Специфическое
IgM-антитело
Хромоген Конъюгат анти-IgM
Наличие РФ - завышение сигнала
Рис. 1. Влияние антител класса IgG и ревматоидного фактора на результаты определения в ИФА антител класса IgM
Все компоненты тест-систем, кроме концентрата отмывающего раствора, готовы к работе и отличаются друг от друга окраской или цветом упаковки.
Все тест-системы имеют унифицированный протокол постановки ИФА (см. рис. 2) и анализ со всеми тест-системами может быть проведен с использованием автоматических анализаторов.
Образец
Конъюгат
Субстрат Стоп-реагент
Рис. 2. Схема постановки ИФА с тест-системами "ЭКОлаб-ВПГ-1 -IgG", "ЭКОлаб-ВПГ-2-lgG" и "ЭКОлаб-ВПГ-1,2-lgM"
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 20 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed