Герпетическая инфекция - Мардланды С.Г.
ISBN 5-8311-0201-7
Скачать (прямая ссылка):
С помощью ПІДР может быть выявлен вирус как активный, так и латентно присутствующий в материале на уровне чувствитель-
22
ности одного вирусного генома на миллион клеток. Положительный результат ПЦР в крови, моче, ликворе говорит об активной инфекции, что может предсказывать развитие соответствующего клинического синдрома, хотя и не всегда. На активную репликацию ВПГ указывает только наличие генов ранней и поздней транскрипции.
Однако, возможности широкого практического использования ПЦР-диагностики в лабораторных исследованиях на ВПГ существенно ограничивает высокая стоимость соответствующих наборов и необходимого для проведения исследований оборудования.
Метод флюоресцирующих антител (МФА).
Метод основан на использовании иммуноглобулинов, меченых красителями, флюоресцирующими при ультрафиолетовм облучении, например, изотиоционатом флюоресциина натрия или родамином, дающими зеленовато-желтую и красную флюоресценцию, соответственно. Результаты МФА учитывают при люминесцентной микроскопии препаратов, обработанных мечеными антителами.
МФА используют в двух вариантах: прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) и непрямой иммунофлюоресценции (НИФ). При прямом методе метят антитела, которые непосредственно взаимодействуют с исследуемым антигеном. В непрямом методе с исследуемым антигеном сначала взаимодействуют специфические к нему антитела, а уже с ними - антивидовые антитела, меченые флюорохромом.
Поскольку локализация антигена зависит от особенностей репродукции вируса и является одним из диагностических признаков, то для этого метода важно, чтобы структура исследуемых клеток не была нарушена.
Показана эффективность этого метода для обнаружения ВГІГ в клинических материалах - мазках и соскобах клеток конъюнктивы, слизистой оболочки полости рта и шейки матки, при исследованиях гистологических срезов в ретроспективной диагностике генерализованной инфекции.
4. Иммунохиминеские методы исследования
Эти методы, основанные на выявлении в исследуемых образцах вирусных антигенов или иммуноглобулинов к ним, в настоящее время наиболее подходят для использования в клинической
23
лабораторной диагностике ВПГ, т.к. они сочетают экспрессность, высокую чувствительность и специфичность, простоту выполнения и относительную дешевизну анализа.
Наиболее распространенными из них являются иммунофлю-оресцентный и иммуноферментный анализ, используемые для выявления в образцах как антигенов ВПГ, так и специфических иммуноглобулинов.
Иммуноферментный анализ (ИФА). Метод основан на использовании специфических иммуноглобулинов, меченых ферментом, активность которого при образовании соответствующих комплексов «антиген-антитело» выявляется по цветной реакции с субстратом этого фермента, внесенным в реакционную среду. Аналогично МФА ИФА для обнаружения антигена также может быть прямым (ферментом метятся антитела к вирусу) или непрямым (ферментом метятся антивидовые антитела).
Чувствительность и МФА, и ИФА при выявлении антигенов ВПГ существенно зависит от стадии патологического процесса. Она наиболее высока (до 85 %) на стадии везикул. В стадии выздоровления обнаружить вирусный антиген, как правило, не удается.
Определение антител к ВПГ
Для лабораторной диагностики герпетической инфекций по наличию специфических антител в исследуемых образцах в лабораторной практике используют реакцию нейтрализации (PH), реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию пассивной гемагглютинации (РИГА), ИФА, иммунный блоттинг. Все эти методы позволяют с различной степенью достоверности установить факт текущего или прошлого контакта пациента с возбудителем.
Диагностика при этом основывается либо на выявлении IgM-ангител (свидетельство начальной фазы первичной инфекции), либо на повышении титра IgG-антител (свидетельство текущей первичной инфекции или ее рецидива).
Некоторые авторы рекомендуют использование этих методов вообще только для подтверждения первичной инфекции или при обследовании больных с тяжелыми осложнениями, поскольку считается, что только у 5% больных с рецидивирующей герпетической инфекцией кожи и слизистых оболочек можно обнаружить четырехкратное повышение уровня противогерпетических антител.
Известный скептицизм в отношении ценности выявления IgG-антител к ВПГ как диагностического признака [В.В.Лебедев и
24
др., 2000], связан также с отсутствием до последнего времени надежных методов дифференциации этих антител по типу вируса, инициировавшего их образование.
Однако повышение чувствительности соответствующих тест-систем, четко фиксирующих минимальные колебания уровня IgG-антител, и надежная дифференциация их по типу В1ІГ может существенно повысить диагностическую ценность указанного метода исследования.
Доказательством этого являются результаты исследований и использования в практике иммуноферментных тест-систем «ЭКО-лаб-ВПГ-1-IgG”, “ЭКОлаб-ВПГ-2-IgG”) и иЭКОлаб-ВПГ-1,2-^М”
Названные тест-системы разработаны ЗАО «ЭКОлаб» совместно с фирмой Viro-Immun Diagnostics (Германия).
