Инфекции в акушерстве и гинекологии - Макаров О.В.
ISBN 5-98322-263-5
Скачать (прямая ссылка):
По мнению ряда авторов, ПЦР сходна по чувствительности с ИФА, более чувствительна, чем заражение клеточной культуры. Однако применяя этот метод, следует учитывать, что, помимо обычных для микробиологических лабораторий предосторожностей, следует принимать меры для предотвращения присутствия даже следов ДНК патогенов. Для постановки метода необходимо достаточное количество помещений для разобщения отдельных этапов работы, строгое соблюдение техники исследования. Достоверность результатов зависит и от качества забора материала, и от его хранения.
Для определения ДНК хламидий часто используют весьма информативный метод точечной гибридизации (дот-гибридизации) нуклеиновых кислот на твердой фазе с использованием ДНК-зонда, меченного биотином. Из исследуемых образцов выделяют суммарную ДНК, образцы исследуемой ДНК и контрольные образцы денатурируют кипячением, фиксируют на нитроцеллюлозном фильтре и гибридизируют с предварительно денатурированным биотипированным ДНК-зондом. Несвязавшийся зонд удаляют путем отмывки фильтра. На следующем этапе фильтр обрабатывают конъюгатом страптавидина с щелочной фосфатазой.
На заключительном этапе выносят субстратный раствор. Окрашивание соответствующих точек свидетельствует о наличии тестируемой ДНК в исследуемом материале (Гаспаров А.С. и др., 2003; Дмитриев Г.А. и др., 1999; Латыпо-ваМ.Ф., 2001).
В настоящее время для диагностики хламидийной инфекции широко используются серологические методы исследования, чаще всего это ИФА. Метод основан на иммуноферментной реакции антиген—антитело с последующим окрашиванием конечного продукта и оценкой результата реакции на спектрофотометре. Для этих целей используют диагностические наборы фирм «Medac Diagnostica» (Германия), «Labsystem» (Финляндия), «Orgenics» (Израиль).
В тест-системах фирмы «Medac diagnostica» (Германия) производится опреде
ление антител к антигенам: родоспецифическому ЛПС хламидий r-ELISA
(IgM, IgG, IgA к Chlamydia) и ГБНМ (IgG, IgA-антитела) С. trachomatis, а также
IgG-антитела к Hsp 60 хламидий.
Достоинствами ИФА являются: высокая чувствительность и специфичность, простота постановки реакции, возможность одновременного обследования большого количества пациентов, объективная оценка результатов.
На сегодняшний день врачи нередко выбирают только одну из методик, максимально, по их мнению, информативную и доступную (ПЦР-диагности-
Роль инфекции и факторов реактивности организма в клинике, диагностике и лечении
наиболее часто встречающихся воспалительных заболеваний женских половых органов 219
ка, ПИФ). Полноценная диагностика урогенитального хламидиоза возможна только при использовании совокупности различных методов исследования.
Следует учитывать жалобы пациенток, данные анамнеза и клинического осмотра. Необходимо подтверждать предполагаемый диагноз обязательным сочетанием прямых и непрямых методов лабораторной диагностики. Целесообразным является сочетание прямого и непрямого методов диагностики. В качестве прямого метода используется ПЦР, которая является высокоинформативной (чувствительность и специфичность, по мнению разных авторов, колеблется от 80 до 100%), применима для скринингового обследования, экономически доступна. В качестве непрямого метода — ИФА, который позволяет поставить диагноз при восходящей хламидийной инфекции, получить дополнительную информацию о течении заболевания.
Метод ПЦР дает возможность выявить у части пациенток специфические фрагменты ДНК С. trachomatis в секрете генитального тракта и начать своевременное лечение. Использование ИФА позволяет подтвердить диагноз «уроге-нитальный хламидиоз» на основании определения диагностически значимого титра антител к С. trachomatis в сыворотке крови пациенток.
У пациенток с восходящей хламидийной инфекцией определение антител к C.trachomatis в диагностически значимых титрах часто является единственным критерием правильной диагностики и проведения адекватного лечения.
Результаты ИФА позволяют оценить «остроту» течения заболевания исходя из сроков выработки, уровня, длительности определения IgG, IgA к С. trachomatis, а также IgG к Hsp 60 хламидий в сыворотке крови пациенток. Высокий титр IgG и/или IgA к С. trachomatis при отсутствии IgG к Hsp 60 С. trachomatis свидетельствует об остром процессе либо об обострении хронического. Длительное определение в сыворотке крови диагностически значимых титров только IgG и/или IgA к С. trachomatis позволяет предположить хроническое течение заболевания. Неоднократное выявление специфических антител к С. trachomatis без тенденции к снижению, а также выявление IgG-антител к Hsp 60 хламидий в сыворотке крови пациенток с урогенитальным хламидиозом в диагностически значимых титрах указывают на персистентное течение хламидийной инфекции (Алешкин В.А. и др., 2004; Скирда Т.А. и др., 2004).
Определение специфических антител методом ИФА может быть использовано для контроля за эффективностью проводимой терапии по изменению уровня специфических Ig к С. trachomatis в сыворотке крови больных до начала терапии и в разные сроки после окончания лечения, а также как критерий излеченности после проведенного курса терапии (Алешкин В.А. и др., 2004).
